HaCaT細胞是人類永生化表皮細胞,，由角質(zhì)形成細胞培育而來的,，保留了角質(zhì)形成細胞分化能力，是非腫瘤來源的人正常皮膚永生化角質(zhì)形成細胞株,，與正常人角質(zhì)形成細胞分化特性相似,，可以繁殖150代以上，但不是腫瘤細胞,，不具有腫瘤特性,。
細胞名稱 | HaCaT（人永生化角質(zhì)形成細胞） |
細胞來源 | 一位62歲患有黑色素瘤男性的病灶外圍正常皮膚 |
形態(tài) | 上皮細胞樣 |
生長特性 | 貼壁生長 |
營養(yǎng)體系 | 89%MEM(abs9503)+10%胎牛血清優(yōu)級(abs972)+1%雙抗(abs9244)+0.2%牛腦垂體提取物(abs9119) |
傳代 | 1:3—1:5，傳代周期2-3天 |
凍存 | 無血清細胞凍存液plus(abs9478)/ 90%培養(yǎng)液+10%DMSO |
應用 | 皮膚生物學和分化研究 |
該細胞較難消化,，胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%) ,，含酚紅(abs47014938)消化5min作用，有時可能高達10min,，主要由于細胞不同分化程度和融合度而異,。注意消化前一定要用PBS清洗細胞2-3次，鋪板時一定要均勻,，因為HaCat成片生長,，鋪板不勻會存在局部生長過密難以消化，生長稀疏部分容易消化過度的情況,。
圖a 低Ca2+條件下HaCat細胞基礎(chǔ)狀態(tài)和圖b高Ca2+條件下HaCat細胞分化狀態(tài)
10%FBS培養(yǎng)體系中的Ca2+足以誘導該細胞分化,，也就是說，正常培養(yǎng)體系下,，該細胞會逐漸分化,，分化前細胞近紡錘形，排列較松散,，分化后細胞向立方體發(fā)展,，排列緊密，呈片狀生長,。
低鈣離子條件下，HaCat增殖更快,，K14的表達僅限于表皮基底層,，而K10和總合蛋白的存在表明表型分化程度更高,。通過免疫熒光實驗證實了HaCat細胞分化表型的獲得，與第6天相比,，分化標記K10在HaCaT細胞中的表達在第14天顯著增加,，幾乎100%的細胞是陽性的，這可能和細胞密度有關(guān),。
牛腦垂體物常用作無血清細胞培養(yǎng)的生長補充劑,，可促進上皮細胞、內(nèi)皮細胞和黑色素細胞增殖,，廣泛用作各種上皮細胞和黑色素細胞培養(yǎng)中的補充劑,。此外，其具有抗氧化能力,，可對抗過氧化氫誘導的細胞壞死,，蛋白質(zhì)氧化，膜破碎和DNA損傷,。
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貨號 | 品名 | 規(guī)格 |
abs9119 | 牛腦垂體提取物 | 20mg/20mg*5 |
abs972 | 胎牛血清（優(yōu)級） | 500mL |
abs9503 | MEM培養(yǎng)基（含NEAA,，含L-谷氨酰胺,，不含丙酮酸鈉，含HEPES） | 500mL |
abs9244 | 青霉素-鏈霉素溶液（100×雙抗） | 100mL |
abs9478 | 無血清細胞凍存液plus | 100mL |
參考文獻
[1] Wilson VG. Growth and differentiation of HaCaT keratinocytes. Methods Mol Biol. 2014;1195:33-41. doi: 10.1007/7651_2013_42. PMID: 24155234.
[2] Colombo I, Sangiovanni E, Maggio R, et al. HaCaT Cells as a Reliable In Vitro Differentiation Model to Dissect the Inflammatory/Repair Response of Human Keratinocytes. Mediators Inflamm. 2017;2017:7435621. doi:10.1155/2017/7435621
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