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細(xì)胞因子相關(guān)問題,,千萬別忽視!

閱讀:927      發(fā)布時間:2023-8-17
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細(xì)胞因子(cytokine,,CK)是免疫原,、絲裂原或其他刺激劑誘導(dǎo)多種細(xì)胞產(chǎn)生的低分子量可溶性蛋白質(zhì),具有調(diào)節(jié)固有免疫和適應(yīng)性免疫,、血細(xì)胞生成,、細(xì)胞生長以及損傷組織修復(fù)等多種功能。


absin細(xì)胞因子


細(xì)胞因子具有以下作用特點:


多向性和靶向性:一種細(xì)胞因子可由多種細(xì)胞產(chǎn)生,,作用于不同的靶細(xì)胞,。例如,,IL-5既可以來源于Th2細(xì)胞,也可以來源于肥大細(xì)胞,,既能活化B細(xì)胞增殖,,又能促進(jìn)嗜酸性粒細(xì)胞分化、成熟,,

即時性:基本不儲存,,隨時產(chǎn)生并發(fā)揮作用。

局部性:通常以自分泌或者旁分泌的形式作用于周圍細(xì)胞,。

相互協(xié)調(diào):以網(wǎng)絡(luò)形式發(fā)揮作用,不同細(xì)胞因子間相互抑制或促進(jìn),。

多重調(diào)節(jié):發(fā)揮的效應(yīng)與細(xì)胞因子濃度,、靶細(xì)胞類型、其他細(xì)胞因子種類以及種屬有關(guān),。


常見細(xì)胞因子的作用:



名稱

功能

FGF

堿性成纖維細(xì)胞生長因子,,bFGF,F(xiàn)GF basic 或 FGF 2 屬于一個大的 FGF 蛋白家族,,后者與包括增殖,、生長和分化的細(xì)胞發(fā)育的許多方面有關(guān)。FGF-basic 是一種維持胚胎干細(xì)胞在培養(yǎng)中保持未分化狀態(tài)的關(guān)鍵成分,。

IL

IL是一類能夠雙向調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)的細(xì)胞因子家族,,主要參與免疫細(xì)胞的分化和激活。IL可劃分為IL-1細(xì)胞因子家族,、共γ鏈細(xì)胞因子家族,、IL-10細(xì)胞因子家族、IL-12細(xì)胞因子家族等,;

EGF

表皮生長因子,,是一種有效的促有絲分裂因子,在體內(nèi)和體外的生長,、增殖和各種表皮和上皮組織  和細(xì)胞培養(yǎng)中的一些成纖維細(xì)胞中起重要作用,。EGF 產(chǎn)生的失調(diào)與某些癌癥的生長和進(jìn)展有關(guān)。

INF

干擾素,,具有抗病毒,、抑制細(xì)胞增殖、調(diào)節(jié)免疫及抗腫瘤作用,。






由于天然的細(xì)胞因子表達(dá)量低,,分泌具有短時自限性,難以收集提純,,一般通過蛋白重組技術(shù)獲得,,即先用基因克隆或化學(xué)合成技術(shù)獲得目的基因,,連接到適合的表達(dá)載體,導(dǎo)入到特定的宿主細(xì)胞,,利用宿主細(xì)胞的遺傳系統(tǒng),,表達(dá)出有功能的蛋白質(zhì)分子。目前常用的有原核,、真核,、昆蟲、哺乳動物四種表達(dá)系統(tǒng),。



表達(dá)系統(tǒng)

特點

原核

產(chǎn)量高,、蛋白常為包涵體,無翻譯后修飾,,大分子蛋白表達(dá)困難

酵母

便于純化,,部分翻譯后修飾有時出現(xiàn)蛋白切割問題,糖基化不能滿足要求

昆蟲

表達(dá)的大多數(shù)蛋白是可溶的,,適合毒性蛋白,,表達(dá)激酶等定位于細(xì)胞內(nèi)的真核蛋白

哺乳動物

完善的翻譯后加工,活性接近天然蛋白,,技術(shù)要求高,,表達(dá)量低





選擇細(xì)胞因子時要注意以下幾個問題:


1)細(xì)胞因子作為動物免疫抗原進(jìn)行檢測類抗體的研究,蛋白純度需大于80%,;若用于晶體及晶體結(jié)構(gòu)研究,,蛋白純度需大于95%;
2)若需選擇不同種屬來源的細(xì)胞因子,,則要判斷兩種種屬的細(xì)胞是否有交叉反應(yīng)活性,。一般來說,不同種屬之間蛋白同源性(序列一致性)在80%以上的基本上可確定為有交叉活性,;
3)根據(jù)實驗?zāi)康倪x擇想要的產(chǎn)品時,,我們還需要關(guān)注一下內(nèi)毒素的水平,特別是作為細(xì)胞添加物使用時,。


許多老師在收到凍干粉之后由于保存或者溶解不當(dāng)造成實驗結(jié)果不理想,,小愛也遇到過很多老師詢問,產(chǎn)品室溫保存了兩個月還能用嗎,?溶解不了怎么回事,?細(xì)胞因子儲存和溶解其實都很簡單,愛必信的細(xì)胞因子說明書中給了明確標(biāo)注,。


1,、收到的凍干粉如何處理?

我們收到的凍干蛋白一般不會立即使用,,這種情況下可放置-20℃儲存,,室溫一般儲存三周左右,,具體時間可參照說明書,請老師們妥善保存收到的產(chǎn)品,。


2,、凍干蛋白一般如何溶解?

敲黑板?。,。∪芙馇?,一定要將凍干粉離心收集于離心管底部,,不同的凍干蛋白需要的溶解劑不同,比如,,abs04698重組人IL4使用中蒸餾水即可溶解,, abs04177 IGF-I蛋白需溶解在500mM乙酸中,這是由PH和離子濃度能多種因素決定的,,大家一定要仔細(xì)閱讀說明書,此外,,一定要溶解到說明書推薦的濃度范圍,,否則可能會造成活性減弱。


3,、溶解方式

用槍頭輕輕捶打即可,,對于相對較難溶解的,可以在低速搖床上靜止兩小時左右,,切不可劇烈震蕩,。



4、溶解后的蛋白如何儲存呢,?

重組蛋白溶液一般可在4-7°C下儲存2-7天,。避免反復(fù)凍融可將溶液分裝于聚丙烯管中(不會吸附蛋白),在<-20°C下穩(wěn)定保存3個月左右,,適當(dāng)加入載體蛋白(BSA,、HAS、FBS等)可減少管壁對重組蛋白的吸附損耗,。


愛必信提供多種細(xì)胞因子,,純度高、內(nèi)毒素含量低,,可登錄了解更多信息,。

小愛本期推薦:


貨號

品名

規(guī)格

abs04842

Mouse IL17A Protein

100μg/500μg/1mg

abs04176

Recombinant Human Epidermal Growth Factor/EGF

10μg/50μg/500μg/1mg

abs04045

Recombinant Human Interleukin-2/IL-2

10μg/50μg/100μg

abs04695

Recombinant Human Noggin

10μg/50μg/500μg/1mg

abs04398

Recombinant Human R-Spondin-1/RSPO1 (C-6His)

10μg/50μg/500μg/1mg

abs04697

Recombinant Mouse IL-4

10μg/50μg/100μg

abs00975

Recombinant Mouse IL-7

10μg

abs04100

Recombinant Mouse Interleukin-2/IL‐2

10μg/50μg/500μg/1mg

abs07000

Recombinant Mouse Interleukin-23/IL-23

10μg/50μg/500μg/1mg

abs04204

Recombinant Human Transforming Growth Factor β-1/TGFB1

10μg/50μg/1mg


好消息!Absin文獻(xiàn)獎勵重磅升級,!




Absin特色產(chǎn)品線:

WB相關(guān):ECL發(fā)光液,、預(yù)染marker,、預(yù)制膠;IHC相關(guān):二抗試劑盒,、組化筆,;IP/CoIP試劑盒;激動劑/抑制劑,;血清,、BSA、蛋白酶K,、CTB,、TTX、CEE,;凋亡試劑盒,;呼吸爆發(fā)試劑盒;ELISA試劑盒,;重組蛋白,;抗體: 二抗、標(biāo)簽抗體,、對照抗體,;定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標(biāo)記/檢測)...


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