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我們辛辛苦苦養(yǎng)好的類器官,，該如何做鑒定呢？通常是HE染色和免疫組化染色,。今天小編帶大家了解一下類器官如何進行包埋及HE染色,。

一、類器官收集

1,、類器官收集（例如24孔板,，收集1-2孔類器官，大約200-500個類器官）,；

2,、4℃靜置 10min,，離心棄去大部分上清,。

二、瓊脂糖凹槽制備

1,、稱量0.2至0.4g瓊脂糖,，加入至燒杯或者小試劑瓶內(nèi)；

2,、加入10mL左右PBS,；

3、微波爐高火融化,，每隔5s暫停打開,，觀察，重復(fù)數(shù)次至瓊脂糖融化,；

4,、取約200uL融化瓊脂糖，加入至600uL 1.5ml EP管內(nèi)（如下圖所示）,；

5,、在盛有瓊脂糖的1.5ml EP管內(nèi)插入一小0.5ml EP管，使瓊脂糖形成一圓尖底凹槽,，室溫或者4℃冰箱靜置數(shù)分鐘,，至瓊脂糖凝固，輕輕轉(zhuǎn)動小0.5ml EP管,，取出0.5ml EP管,，可看到瓊脂糖內(nèi)形成一個深圓尖底槽；

6,、吸取類器官沉淀置于凹槽底部,，盡量包埋在中間位置；

7、加入PBS至高于瓊脂糖槽的邊緣,。

三,、類器官固定

四、類器官包埋

1,、脫水：取出已凝固的含有類器官沉淀的瓊脂糖塊,，在梯度乙醇中脫水，70%,、80%,、90%和95%乙醇各1h，100%乙醇30min,，待其凝固,；

2、融蠟：提前4h左右打開烘箱,，65℃溶蠟,；

3、透明：將脫水完成后的瓊脂糖塊轉(zhuǎn)移至組織包埋盒中（二甲苯處理前需一直浸泡在無水乙醇中）,，將包埋盒轉(zhuǎn)移至二甲苯中5min處理兩次,；注：因二甲苯有毒性，需在通風(fēng)良好區(qū)域進行操作,，取出時盡量瀝盡殘留二甲苯,；

4、浸蠟：透明化處理完成后立即轉(zhuǎn)入已經(jīng)融化的蠟缸中,，60℃浸蠟2h后,，更換新的蠟缸再次浸蠟2h；

5,、包埋：包埋在冰盒上進行,，將融好的純蠟倒入蠟盒三分之一處，將瓊脂塊放置于中間位置,，然后再滴蠟包埋直到倒?jié)M,。待蠟塊凝固后，小心脫下模具,。

五,、類器官HE染色

1、石蠟切片脫蠟至水

依次將切片放入二甲苯I 10min,；二甲苯Ⅱ10min,；無水乙醇Ⅰ5min；無水乙醇Ⅱ5min,；95%酒精5min,；90%酒精5min,；80%酒精5min；70%酒精5min,；蒸餾水洗,。

2、蘇木素染細胞核

切片入Harris蘇木素染3-8min,，自來水洗,。

3、伊紅染細胞質(zhì)

切片入伊紅染液中染色1-3min,，自來水洗,。

4、脫水封片

將切片依次放入95%酒精I 5min ,；95%酒精II 5min,；無水乙醇Ⅰ5min ；無水乙醇Ⅱ5min ,；二甲苯Ⅰ5min ,；二甲苯Ⅱ5min中脫水透明，將切片從二甲苯拿出來稍晾干,，中性樹膠封片,。

5,、顯微鏡鏡檢,，圖像采集分析

六、類器官鑒定-HE染色結(jié)果（以肺癌為例）

人肺癌類器官HE染色

今天講解就到這了,，大家如有類器官包埋及HE染色問題,，歡迎交流哦！

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