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Caco-2細胞分離自一名72歲男性的直腸原位癌細胞,，當長到滿時表現(xiàn)出特征性的腸上皮細胞分化。因此,，Caco-2細胞模型是十幾年來國外廣泛采用的一種研究藥物小腸吸收的體外模型,，具有相對簡單、重復性較好,、應用范圍較廣的特點,。

表1 Caco-2細胞基本信息

圖1 Caco-2（人結直腸腺癌細胞）

首先，我們要討論的第一個問題是如何判斷細胞狀態(tài)好不好,？為了更直觀地了解細胞狀態(tài),，我們可以看一下如下圖2和圖3。正常的Caco-2細胞呈島狀生長,，細胞間連接緊密,，細胞群的邊界光滑，細胞群中常常含有巨大的空泡（屬于正?，F(xiàn)象）,。

圖2 Caco-2正常形態(tài)

圖3 Caco-2正常形態(tài)

接下來，我們討論第二個問題是該細胞消化難問題,。該類細胞間連接緊密,，細胞難以消化解離，并且培養(yǎng)時間越久,，細胞間連接越緊密越難消化,。所以，消化時要注意以下幾點：

1,、消化前用PBS（abs9459）清洗細胞兩遍,；
2、消化時間控制在5-10分鐘,，當細胞能夠被吹散為小的細胞團塊時,，即可終止消化,；
3、消化吹打成單個細胞再進行傳代,。

最后,，我們要討論的是細胞貼壁和增殖緩慢問題。尤其剛復蘇時細胞貼壁特別慢,，一般2到3天貼壁展開（還可能會有空泡）,；有少量發(fā)亮的細胞漂浮或黏附在細胞克隆上是正常的，隨后會進入克隆并正常生長,；為避免在細胞附著初期干擾細胞,，建議到第三天再換液。

同時該細胞增殖緩慢,，倍增時間約為72小時,，按1:3傳代的情況下，約一周傳代一次,。由于該細胞對營養(yǎng)需求高,，建議使用20%的優(yōu)級胎牛血清（abs972）。如果細胞隨著培養(yǎng)過程,，漂浮得越來越嚴重,，甚至大塊兒飄起，就要檢查培養(yǎng)基成分和培養(yǎng)環(huán)境是否出現(xiàn)異常,。

本期講解就到這里了,，如有細胞培養(yǎng)問題，歡迎掃碼加入我們微信群交流,。

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