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收集生長(zhǎng)至較大尺寸類器官：96孔板，生長(zhǎng)密度較大時(shí),，使用移液槍取半孔以上,，清洗1至3遍，洗去大部分基質(zhì)膠,，離心沉淀,，棄除大部分上清,。

1）稱量0.2至0.4g瓊脂糖,，加入至燒杯或者小試劑瓶?jī)?nèi)；

2）加入10mL左右PBS,；

3）微波爐高火融化,，每隔5s暫停打開，觀察,，重復(fù)數(shù)次至瓊脂糖融化,；

4）取約200uL融化瓊脂糖，加入至600uL EP管內(nèi),；

5）在盛有瓊脂糖的小EP管內(nèi)插入一小PCR管,，使瓊脂糖形成一圓尖底凹槽，室溫或者4℃冰箱靜置數(shù)分鐘,，至瓊脂糖凝固,，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)小PCR管，取出PCR管,，可看到瓊脂糖內(nèi)形成一個(gè)深圓尖底槽,。

1）將類器官輕輕吸出轉(zhuǎn)移至一固定槽底部,；

2）輕輕加入PBS至高于瓊脂糖槽的邊緣,；

3）蓋上蓋子，水平離心機(jī)1000 rpm,，離心5min；

4）輕輕吸出除底部類器官沉淀外的PBS上清,；

5）加入融化的瓊脂糖液體200μL,；

6）室溫靜置至瓊脂糖凝固；

7）剪去固定管的底部和蓋子,，置于2 mL EP管內(nèi),，加入多聚甲醛至差不多裝滿整個(gè)EP管，置于4℃冰箱過夜,。

1）脫水：取出已凝固的含有類器官沉淀的瓊脂糖塊，在梯度乙醇中脫水,，70%,、80%、90%,、95%乙醇各1h,，100%乙醇30min,待其凝固,。

2）融蠟：提前4h左右打開烘箱，65℃溶蠟,。

3）透明：將脫水完成后的瓊脂糖塊轉(zhuǎn)移至組織包埋盒中（二甲苯處理前需一直浸泡在無(wú)水乙醇中）,，將包埋盒轉(zhuǎn)移至二甲苯中5min處理兩次。

注：因二甲苯有毒性,，需在通風(fēng)良好區(qū)域進(jìn)行操作,，取出時(shí)盡量瀝盡殘留二甲苯。

4）浸蠟：透明化處理完成后立即轉(zhuǎn)入已經(jīng)融化的蠟缸中,，60℃浸蠟2h后,，更換新的蠟缸再次浸蠟2h。

5）包埋：包埋在冰盒上進(jìn)行,，將融好的純蠟倒入蠟盒三分之一處,，將瓊脂塊放置于中間位置，然后再滴蠟包埋直到倒?jié)M,。待蠟塊凝固后,，小心脫下模具。