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   通常我們用ELISA來(lái)檢測(cè)的樣本是有多種類(lèi)型的，如血清,、血漿,、尿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清或組織勻漿液等,，不同類(lèi)型的檢測(cè)樣本前期的處理方法是不一樣的,。正確的處理樣本是保證ELISA檢測(cè)的正確性和準(zhǔn)確性的第一步。

　　1.血清

　　血清是常用于ELISA檢測(cè)的一類(lèi)樣本,，處理也比較簡(jiǎn)單,。用無(wú)熱原、無(wú)內(nèi)毒素的試管或離心管采集血液標(biāo)本,，將試管或離心管室溫放置2小時(shí)或4℃一個(gè)晚上,，使血清析出。（最好將試管或離心管傾斜放置,，使液面橫截面增大,，能使血清更大程度的析出）。4℃1000×g離心20分鐘,，仔細(xì)收集上清,。建議將血清分裝多份，-20℃或-80℃保存,，避免反復(fù)凍融,。

　　采血過(guò)程中應(yīng)避免溶血，因?yàn)榧t細(xì)胞裂解時(shí)會(huì)釋放具有過(guò)氧化酶活性的物質(zhì),，在以HRP為標(biāo)記的ELISA檢測(cè)中會(huì)有非特異性的顯色,，而導(dǎo)致檢測(cè)的不準(zhǔn)確性。同時(shí)也應(yīng)避免細(xì)菌污染,，因?yàn)榫w內(nèi)可能含有內(nèi)源性的HRP從而導(dǎo)致檢測(cè)的假陽(yáng)性,。

　　2.血漿

　　ELISA實(shí)驗(yàn)用含抗凝劑的采血管或離心管采集血液標(biāo)本,，標(biāo)本采集后30min內(nèi)4℃1000×g離心15min，取上清即血漿,。將上清分裝多份,，-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融,。避免使用溶血或高血脂的標(biāo)本,。常用的抗凝劑為EDTA、肝素鈉和枸櫞酸鈉等,，檢測(cè)時(shí)還應(yīng)仔細(xì)閱讀試劑盒說(shuō)明書(shū),，檢查試劑盒是否對(duì)抗凝劑有特殊要求。

　　3.細(xì)胞培養(yǎng)上清

　　取細(xì)胞培養(yǎng)上清到離心管,，1000×g離心20min,，除去細(xì)胞碎片及雜質(zhì)，取上清,，-20℃或-80℃保存,，避免反復(fù)凍融。

　　4.細(xì)胞裂解液

　?。?）吸去培養(yǎng)板內(nèi)的培養(yǎng)基,，用胰酶消化細(xì)胞，加適量培養(yǎng)基將細(xì)胞從培養(yǎng)板上吹下來(lái),。懸浮細(xì)胞可省略,。

　　（2）收集細(xì)胞懸液,，1000×g離心10min,，棄去培養(yǎng)基，用預(yù)冷的PBS潤(rùn)洗3次,。

　?。?）加入適量的預(yù)冷PBS或細(xì)胞裂解液（臨用前加入蛋白酶抑制劑）重懸細(xì)胞。通常6孔板一個(gè)孔的細(xì)胞量需要150~250μL PBS重懸,。

　?。?）將樣品放入-20℃或-80℃，使樣品冷凍,，再放室溫解凍樣品,，反復(fù)凍融幾次，使細(xì)胞充分裂解,。也可將樣品進(jìn)行超聲破碎,，以達(dá)到裂解的目的。

　?。?）4℃10000×g離心10min,，除去細(xì)胞碎片,，取上清，-20℃或-80℃保存,，避免反復(fù)凍融,。