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一般細胞長至80%-90%密度則需要傳代消化,，貼壁細胞傳代前,，需要把細胞用消化試劑從培養(yǎng)容器表面解離出來，細胞得以分離成單個懸液傳代至含新鮮培養(yǎng)基的新容器內(nèi),。

細胞消化常用方法

酶消化法

胰酶,。這是用得最多的。一般濃度在0.25-0.5%,。作用時間根據(jù)細胞種類,、作用溫度等因素而變化很大,，從幾分鐘到幾十分鐘不等。

0.25%的胰酶作用于單層貼壁的細胞,，在37度條件下,，一般消化1-5分鐘就足夠了。終止是用血清,。主要作用于細胞間,。配制時不能用含鈣、鎂的平衡液,，否則影響活性,。保存于-20度。

離子螯合劑

不破壞細胞表面分子,，僅與CAMs螯合,，因此，如果檢測細胞表面分子的話,，盡量,，甚至是一定不要用酶消化法。

EDTA,。一般濃度在0.02%左右,。作用于細胞與間質(zhì)，對細胞間也有一定作用,。注意,，它能顯著影響pH值，而且在弱堿性條件下才易溶,。因此,，配制時應調(diào)節(jié)好酸堿度。它不能被終和,。因此,，消化下來的細胞要洗一遍。

物理法

直接吹打或用細胞刮子將細胞刮下來,。

細胞消化液

愛必信細胞消化液使用原料為基因工程方法生產(chǎn)的胰蛋白酶,，無動物源性，無病毒污染可能性,，且內(nèi)毒素水平低于藥典標準（<0.06EU/mL）,。可以替代動物源性胰蛋白酶,?？捎糜诓溉閯游锛毎㈤g充質(zhì)干細胞等原代細胞。

使用方法：

1,、在顯微鏡下觀察細胞 ,，當細胞融合度達到 90%，即可傳代,。

2,、在超凈臺/安全柜中，吸走培養(yǎng)瓶中舊的培養(yǎng)液,，加入 PBS 溶液洗一次,，加入細胞消化液使之*覆蓋皿/瓶底。

3,、室溫孵育 4-5 分鐘或 37℃孵育 2-3 分鐘（不同細胞類型消化時間略有差異）,，顯微鏡下觀察到大 部分細胞邊緣開始脫離皿/瓶底。

4,、加入與消化液等倍體積細胞培養(yǎng)基,，用移液器輕輕吹打瓶壁上未*脫離的細胞，并輕輕吹打混 勻,，使細胞*分散。

5,、將細胞懸液轉(zhuǎn)移到離心管中,，1200 rpm 離心 3 min。

6,、棄上清,，加入對應細胞培養(yǎng)液，重懸細胞,，按比例進行傳代,，均勻鋪在培養(yǎng)皿/瓶中，置于 37℃,， 5%CO2 條件下培養(yǎng),。

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