做貼壁細胞的實驗,，經(jīng)常需要做細胞鋪板,。這個實驗看似簡單，其實也不是那么好做的,。關鍵是要鋪得均勻鋪得平整,，要是中間密周圍稀，或者周圍密中間禿頂,，那就露怯啦,。
收集細胞要混勻
消化后的細胞一定要充分混勻，要把聚在一起的細胞團充分地吹打開,，最好是單個的狀態(tài),，但同時又不能損傷細胞,，可以用玻璃吸管的移液器操作,。離心也很有講究，一般用1000 rpm/min即可,。離心力太大細胞容易抱團,！然后懸浮離心后的細胞團時，先不要把所有液體都加進去,！一般先加2mL液體,，然后用1mL移液器輕輕將細胞吹起，細胞要像云霧一樣散開,，這樣易于形成單細胞,。
接種細胞須小心
鋪6孔板,，12孔板或24孔板，先在每個孔里面加1mL的培養(yǎng)基,，晃動使之鋪勻整個孔底,，然后加入1 mL的細胞懸液。從孔的左邊靠近底部慢慢加入,，這樣細胞懸液會平鋪在整個孔底,，細胞分散較均勻，注意加完細胞懸液后要放工作臺靜置一下,。這里又有一個竅門,，放在顯微鏡的載物臺上面。因為顯微鏡的載物臺是水平校正過的,，比什么桌面,、超凈臺什么的要平多了。在載物臺上放置20-30分鐘,，細胞不差這一會溫度和二氧化碳的,，等細胞貼壁了，輕輕移入到孵箱中,。
鋪96孔板,，我每孔是加100微升細胞懸液，加完半邊板48孔后,，將剩下的未加的細胞懸液再混一下,，再繼續(xù)加剩余的半邊板子，都加完后蓋上蓋子,，左手輕輕扶住板的左邊,，右手輕輕敲擊板的右邊緣，注意把握力度,，敲三次即可,，太大力或次數(shù)太多會導致細胞集中成堆。也有人推薦輕微的左三圈,、右三圈,、前三圈、后三圈,。
輕輕敲打勿抱團
細胞懸液加完后,，將細胞培養(yǎng)板抬高，對著燈光,，從底部往上看,，看細胞有沒有抱團。如果有抱團的話，用手指從底部輕輕敲打,，使之分散,。也可以用平板振蕩器稍稍振蕩一下，效果不錯,。參數(shù)要設置成振幅小而頻率高哈,。
十字交叉要水平
觀察和敲打后放入培養(yǎng)箱，然后畫“十字”,，就是把細胞培養(yǎng)板貼著培養(yǎng)箱擱板,，前后方向來回晃動10次，再左右方向晃動10次,，正好是一個“十” 字形,。然后就讓它靜靜地呆在培養(yǎng)箱擱板上，沒事不要去動它,。這里要注意的是,，托架應該裝在四根立柱相同高度的孔上，培養(yǎng)箱的擱板要水平校正,，盡量地做到水平,。擱板會向一個方向傾斜，對于貼壁時間長的細胞,，就算當時混勻了,，放進培養(yǎng)箱后也搖勻了，但是重力作用下細胞也會向一側聚集,。 培養(yǎng)箱里面或者外面盡量不要放可以產(chǎn)生振動的儀器,，比如蠕動泵、離心機,、渦旋器一類的儀器,。這些儀器產(chǎn)生的振動對細胞貼壁有影響，也可能會導致細胞貼壁不均勻,。
細胞培養(yǎng)技術指的是細胞在體外條件下的生長,，在培養(yǎng)的過程中細胞不再形成組織(動物)。培養(yǎng)物是單個細胞或細胞群,。細胞在培養(yǎng)時都要生活在人工環(huán)境中,，由于環(huán)境的改變，細胞的移動或受一些其他因素的影響,，培養(yǎng)時間加長,，傳代導致細胞出現(xiàn)單一化型,。
9
立即詢價
您提交后,，專屬客服將第一時間為您服務