蛋白酶k是一種枯草蛋白酶類的高活性蛋白酶，用于生物樣品中蛋白質(zhì)的一般降解,。從林伯氏白色念球菌（tritirachiumalbumlimber）中純化得到,。蛋白酶K，是一種切割活性較廣的絲氨酸蛋白酶,。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽鍵,。此酶經(jīng)純化去除了RNA酶和DNA酶活性。由于蛋白酶K在尿素和SDS中穩(wěn)定,，還具有降解天然蛋白質(zhì)的能力,，因而它應(yīng)用很廣泛,，包括制備脈沖電泳的染色體DNA,，蛋白質(zhì)印跡以及去除DNA和RNA制備中的核酸酶。蛋白酶K的一般工作濃度是50—100μg/ml,。在較廣的pH范圍內(nèi)（pH4-12.5）均有活性,。值得注意的是，蛋白酶K在原位雜交技術(shù)中通常用于雜交前的處理,它具有消化包圍靶DNA蛋白質(zhì)的作用,以增加探針與靶核酸結(jié)合的機會,提高雜交信號.但蛋白酶K的濃度過高,、消化時間過長或孵育溫度過高時,都會對細胞的結(jié)構(gòu)有一定的破壞,導(dǎo)致組織切片的脫落,細胞核的消失,從而影響雜交結(jié)果.EDTA緩沖液可以替代蛋白酶K的作用,解決上述出現(xiàn)的問題,并能達到理想的染色效果.
蛋白酶K家族包含了各種由真菌,、酵母及革蘭氏陰性細菌分泌的細胞內(nèi)肽酶。與其它的蛋白酶相比較,，蛋白酶K具有高活力和高穩(wěn)定性,，其酶活不會被尿素,、SDS和EDTA等變性劑抑制，且在高溫,、高鹽或較高的pH等條件下,，蛋白酶K仍能保持較高活性。因該酶在較廣的pH范圍(4～12.5)內(nèi)及高溫(50～70℃)均有活性,，在提取DNA和RNA的緩沖液中具有很高的活性,，可用于質(zhì)粒或基因組DNA,、RNA的分離,，是DNA提取的關(guān)鍵試劑?！ ?/div>
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