上一期我們?yōu)榇蠹覅R總了ELISA實(shí)驗(yàn)原理,、樣本準(zhǔn)備和預(yù)實(shí)驗(yàn)相關(guān)的十個(gè)常見問題及解答,，可能有心急的小伙伴早就想要了解更多后續(xù)關(guān)于ELISA實(shí)驗(yàn)方面的問題了,，不要走開，接下來將給您帶來相關(guān)解答~
Q：in vivo實(shí)驗(yàn)周期長(zhǎng),，不太好做預(yù)實(shí)驗(yàn),，對(duì)ELISA結(jié)果會(huì)有影響么？怎么辦,？
A：如果您實(shí)驗(yàn)室之前建立的in vivo實(shí)驗(yàn)protocol經(jīng)過驗(yàn)證,，可以保證有效性，那么,，可以不用再進(jìn)行相關(guān)的預(yù)實(shí)驗(yàn),；并且，如果實(shí)驗(yàn)周期較長(zhǎng),，樣本獲取不易,，同時(shí)又需要檢測(cè)較多指標(biāo)，建議將樣品分裝凍存,，避免反復(fù)凍融,。ELISA實(shí)驗(yàn)還是建議進(jìn)行一下預(yù)實(shí)驗(yàn)，摸清楚樣本的佳稀釋比例,，取得更好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,。
Q：檢測(cè)樣本是細(xì)胞培養(yǎng)上清，那么細(xì)胞數(shù)目對(duì)炎癥因子的濃度有影響嗎,？
A：有影響,，所以不同樣本可以比較的前提條件是培養(yǎng)細(xì)胞數(shù)水平接近一致。因不同處理,，可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞生產(chǎn)狀態(tài)不同,，要保證在鋪板時(shí)接種細(xì)胞數(shù)量水平一致。
Q：打開試劑盒,，發(fā)現(xiàn)wash buffer析出結(jié)晶,，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有影響么？怎么辦,？
A：wash buffer為高濃度鹽溶液,，在低溫保存條件下，有可能出現(xiàn)結(jié)晶析出,，為正?，F(xiàn)象，可以放在37℃或55℃烘箱中,，析出的結(jié)晶會(huì)溶解,，溶解后可正常使用。不可以在結(jié)晶存在的情況下配置wash buffer,。
Q：愛必信的ELISA試劑盒顯色液是雙組份的,，有些其他品牌的是單組分的,，使用單組分的有影響么？
A：HRP酶標(biāo)二抗的ELISA試劑盒,，顯色底物一般為TMB,，TMB不穩(wěn)定，曝光或污染氧化后會(huì)出現(xiàn)顯色反應(yīng),，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)背景升高,，或無法使用，所以愛必信的ELISA試劑盒將顯色液調(diào)整為雙組份,，方便穩(wěn)定保存,，僅在使用前混合，避免了TMB的不穩(wěn)定影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,。如您選用的試劑盒為單組分顯色液,，在使用前檢測(cè)是否為無色透明，如果是正常的,，對(duì)結(jié)果也沒有影響,，可以放心使用。
Q：同一樣品多次ELISA檢測(cè),，測(cè)試結(jié)果差異大怎么解決,？
A：應(yīng)考慮的問題包括：
Q：副孔差別比較大，是沒洗干凈嗎,？
A：復(fù)孔值差異較大，主要原因應(yīng)考慮加樣是否準(zhǔn)確,，洗板過程中是否有殘留以及是否有交叉污染,。加樣應(yīng)注意移液器量程，以及槍頭殘留問題,；洗板過程應(yīng)注意不要有殘留液體,，需要進(jìn)行拍干操作；孵育過程要更換封板膜,，拍干過程要換吸水紙,，避免交叉污染,。
Q：加完終止液之后測(cè)的幾次數(shù)據(jù)差別也蠻大，是什么原因,？
A：加完終止液后,，顯色反應(yīng)也不是永遠(yuǎn)停止，形成的黃色顏色會(huì)隨著時(shí)間延長(zhǎng)繼續(xù)加深,，建議在15 min內(nèi)讀數(shù),。
Q：整個(gè)過程需要避光嗎？避光需要避到什么程度呢,？
A：ELISA實(shí)驗(yàn)中,，在酶標(biāo)抗體孵育，以及顯色底物孵育這兩步建議避光,，其他步驟無需避光,。避光可采用錫紙包裹，或?qū)⒄麄€(gè)ELISA板子放入暗盒或抽屜等無光處即可,。
Q：封板膜什么時(shí)候用,？每次加液后都要換嗎？
A：封板膜在孵育樣品,、檢測(cè)抗體以及HRP酶標(biāo)抗體時(shí),，都要蓋好封板膜，減少揮發(fā)及污染幾率,。每次使用后要更換新的封板膜,。
Q：ELISA實(shí)驗(yàn)中的洗板步驟如果沒有洗板機(jī)，需要如何操作,？
A：實(shí)驗(yàn)室ELISA實(shí)驗(yàn)做的較多,，還是建議使用洗板機(jī)洗板，效果更好,，也更方便控制,。如果沒有洗板機(jī)，在洗板過程中,，需要注意洗板液添加后不要從孔中溢出,，在加洗板液后，靜置1-2min,，甩干液體后,，在吸水紙上大力拍干；重復(fù)三次,。
Q：手動(dòng)洗板過程中,，拍過抗體或抗原的濾紙需要扔嗎？
A：是需要更換的,，防止造成交叉污染,，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,。
今天的FAQ就到這里啦，小編在這里做個(gè)總結(jié),，實(shí)驗(yàn)過程中重要的就是上樣,、孵育和洗板，上樣要注意樣本混勻,、加樣準(zhǔn)確,，孵育要蓋好封板膜，避免交叉污染,，洗滌則要避免液體殘留,，建議洗板機(jī)洗板，并且要拍干,。注意這些細(xì)節(jié)問題,，相信各位同學(xué)肯定可以得到好的ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果，下期我們?cè)俳o您帶來ELISA數(shù)據(jù)獲取及處理方面的一些問題,，感興趣的小伙伴們繼續(xù)關(guān)注吧~
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