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如何利用牛血清白蛋白測定蛋白濃度,?

閱讀:4186      發(fā)布時間:2019-8-19
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  牛血清白蛋白(BSA)在生化實驗中有廣泛的應用,一般作為穩(wěn)定劑被用于限制酶或者修飾酶的保存溶液和反應液中,穩(wěn)定酶活性,,并可防止酶的分解和非特異性吸附,;ELISA、WB中也常常用到,,比如封閉液,,樣本稀釋液,酶結(jié)合物稀釋液都可以用BSA,;蛋白定量時作為標準物,;酶活測定反應中作為陰性對照;血液中的白蛋白主要起維持滲透壓作用,、PH緩沖作用,、載體作用和營養(yǎng)作用,在動物細胞無血清培養(yǎng)中,,添加白蛋白可起到生理和機械保護作用和載體作用,。
  BSA一般做為穩(wěn)定劑被用于限制酶或者修飾酶的保存溶液和反應液中,因為有些酶在低濃度下不穩(wěn)定或活性低,。加入BSA后,它可能起到“保護”或“載體”作用,,不少酶類添加BSA后能使其活性大幅度提高,。不需要加BSA的酶加入BSA一般不會受到什么影響。對多數(shù)底物DNA而言,,BSA可以使酶切更*,,并可實現(xiàn)重復切割。在37℃,,酶切反應超過1h時,,BSA可以使酶更加穩(wěn)定,因為在不含BSA的反應緩沖液中,,許多限制性內(nèi)切酶在37℃下只能存活10~20min甚至更短的時間,。而BSA可以結(jié)合緩沖液或底物DNA中抑制限制性內(nèi)切酶活性的金屬離子和其它化學物質(zhì),。
  測定蛋白濃度
  按50:1配置工作液。10ul蛋白標準液+90ulPBS液稀釋成0.5mg/ml的蛋白標準液,。再分別以0,、1、2,、4,、8、12,、16,、20ul將蛋白標準液加入96孔板的第1~8標準孔中,在其他樣品孔中加入10ul待測樣品,。分別加PBS定容至20ul,。各孔中加入200ul工作液,室溫放置2小時,。用酶標儀測定蛋白濃度,,依標準曲線算出蛋白濃度。

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