在免疫檢測過程中,,需要將抗體固定在固相表面,如微孔板,磁顆粒,、聚苯乙烯微球或硝酸纖維膜表面,。由于蛋白是一種粘性較大的分子,檢測過程中,,樣本中的雜蛋白會與固相表面的疏水位點發(fā)生非特異性結(jié)合,,造成背景干擾。因此,,需要將固相表面的多余位點用封閉劑將其封閉,,常用的封閉劑,如BSA,、酪蛋白,、明膠等能夠吸附在固相表面,防止抗體,、或者抗原與固相表面發(fā)生非特異性結(jié)合,,降低檢測本底,提高靈敏度,。
牛血清白蛋白是一種球蛋白,,分子量約為66.5kDa,表面含有大量的氨基和羧基殘基,,并且BSA的空間結(jié)構(gòu)能夠隨著溫度,、pH、鹽濃度發(fā)生變化,,是一種柔性分子,。作為常見的封閉蛋白,BSA能夠與親水表面,、疏水表面,,以及活化的共價結(jié)合表面,如活化羧基,、氨基,、環(huán)氧基、甲苯磺?;冉Y(jié)合,抑制非特異性吸附,,是一種理想的固相封閉劑,。
牛血清白蛋白表面含有大量的羧基、氨基,,能夠用于表面的活化基團(tuán)結(jié)合,,封閉多余位點,為常見的是化學(xué)發(fā)光免疫磁珠偶聯(lián)抗體當(dāng)中的應(yīng)用。如用EDC活化羧基表面磁珠后,,能夠和抗體表面氨基反應(yīng),,使抗體共價結(jié)合在磁珠表面。這一過程需要對多余的活化羧基位點進(jìn)行封閉,,BSA分子尺寸更小,,能夠進(jìn)入到表面抗體間的間隙,并且由于表面含有大量的氨基,,與活化羧基反應(yīng),,封閉多余的活性位點。同時,,BSA表面含有大量的羧基,,還能夠改善磁珠的親水性。另外,,BSA表面含有一定的氨基酸疏水殘基,,如丙氨酸、亮氨酸等,,也能夠?qū)Ρ砻娴氖杷稽c進(jìn)行封閉,。
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