蛋白酶K是一種用途廣泛的非特異性的絲氨酸蛋白酶,。在pH4到pH12的條件下均有活性，在SDS,、尿素或EDTA存在時(shí)亦很穩(wěn)定,。蛋白酶K常用于提取mRNA,、基因組DNA，或用于從各種細(xì)胞中提純DNA和RNA時(shí)消化雜蛋白,。還可用于糖蛋白的修飾,，以及蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)研究等方面。
蛋白酶K的應(yīng)用比較廣泛,，它可以消化包圍靶DNA蛋白,，因此使用羅氏蛋白酶K能夠增加探針與靶核酸結(jié)合的機(jī)會增強(qiáng)雜交信號，但在使用羅氏蛋白酶K時(shí)要注意使用的濃度,，過高或者過低都會破壞細(xì)胞的結(jié)構(gòu),、核消失等影響試驗(yàn)結(jié)果。
蛋白酶K在原位雜交技術(shù)中通常用于雜交前的處理,，它具有消化包圍靶DNA蛋白質(zhì)的作用,，以增加探針與靶核酸結(jié)合的機(jī)會，提高雜交信號,。但蛋白酶K的濃度過高,、消化時(shí)間過長或孵育溫度過高時(shí)，都會對細(xì)胞的結(jié)構(gòu)有一定的破壞,，導(dǎo)致組織切片的脫落,，細(xì)胞核的消失，從而影響雜交結(jié)果,。EDTA緩沖液可以替代蛋白酶K的作用,，解決上述出現(xiàn)的問題，并能達(dá)到理想的染色效果,。
蛋白酶K的保存：保存在-20℃冰箱里,，避免反復(fù)凍融，有效保證12月,。孵育溫度為55至65℃,，理想孵育溫度為58℃，孵育時(shí)間為15分鐘至48小時(shí);理想孵育時(shí)間為2小時(shí),。
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