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如果想簡(jiǎn)單,、快速地分離細(xì)胞,，大家反應(yīng)肯定是密度梯度離心介質(zhì)；如果您想分離人淋巴細(xì)胞,，那當(dāng)然少不了Ficoll啦,。

Ficoll是蔗糖的多聚體，呈中性,，平均分子量為400,000,，當(dāng)密度為1.2g／ml仍未超出正常生理性滲透壓,也不穿過(guò)生物膜。紅細(xì)胞,、粒細(xì)胞比重大,，離心后沉于管底；淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞的比重小于或等于分層液比重,，離心后漂浮于分層液的液面上,，也可有少部分細(xì)胞懸浮在分層液中。吸取分層液液面的細(xì)胞,，就可從外周血中分離到單個(gè)核細(xì)胞,。

PBMC（Peripheral blood mononuclear cell），外周血單個(gè)核細(xì)胞,，其細(xì)胞類(lèi)型為血液中具有單個(gè)核的細(xì)胞,，主要包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞等，其中淋巴細(xì)胞占很大一部分,。

愛(ài)必信淋巴細(xì)胞分離介質(zhì)Lymphocyte Separation Medium（human, Ficoll-Paque）是一種無(wú)菌的,、即用型的Ficoll-泛影酸鈉密度梯度介質(zhì)，能夠簡(jiǎn)單快速的從少量或大量的人外周血,、骨髓和臍帶血中高產(chǎn)和高純度的提純淋巴細(xì)胞,。本品內(nèi)毒素水平非常低，小于0.12EU/mL,，分離所得的細(xì)胞中95%左右為單個(gè)核細(xì)胞,，細(xì)胞存活率大于90%,，回收率為60%左右。

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Ficoll-Paque分離人外周血PBMC的示意圖：

操作protocol：

01\ 樣本準(zhǔn)備

將2mL外周血轉(zhuǎn)移到15mL離心管中,；

用等量的2mLPBS稀釋外周血,，注意吹打或顛倒混勻（如需無(wú)菌操作請(qǐng)?jiān)诔瑑襞_(tái)內(nèi)完成）；

02\ 分離步驟

在離心管中加入3mL 提前混勻的Ficoll-Paque（無(wú)菌操作請(qǐng)用注射器）,；

將稀釋好的血液樣本緩慢加在Ficoll細(xì)胞分離液上,，保證Ficoll與樣本之間界面清晰（注意不要吹打或顛倒混勻）；

離心300g,，20℃,，20min（注意要設(shè)置緩降，不能驟停）,；

輕輕移除上層分離液（血漿）,；

                                                       愛(ài)必信abs930 Ficoll-Paque分離淋巴細(xì)胞實(shí)驗(yàn)圖

03\ 洗滌淋巴細(xì)胞

吸取“白膜層”PBMC，將其轉(zhuǎn)移到新的15mL離心管中,；

加3-5倍PBS充分混勻,；

離心300g，20℃,，10min（*棄去上清,，沉淀即PBMC細(xì)胞）；

用適量PBS重懸,、進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)（當(dāng)細(xì)胞量＞10E7時(shí),，要擴(kuò)大相應(yīng)試劑用量）；

離心300g,，10min（*棄去上清）,；

備注：

（1）實(shí)驗(yàn)操作前，先將Ficoll-Paque和血液樣本在室溫放置一段時(shí)間,，保持溫度為18℃和20℃,；

（2）分離PBMC步離心的時(shí)候，一定不能設(shè)置制動(dòng)或設(shè)置低水平的制動(dòng),，否則將分層混亂,。

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二抗、標(biāo)簽抗體,、對(duì)照抗體,；WB相關(guān)：ECL發(fā)光液、預(yù)染marker,、預(yù)制膠,；IHC相關(guān)：二抗試劑盒、組化筆,；IP/CoIP試劑盒,；細(xì)胞因子,、信號(hào)通路調(diào)節(jié)劑；血清,、BSA、蛋白酶K,、CTB,、TTX、CEE,；凋亡試劑盒,、呼吸爆發(fā)試劑盒；動(dòng)植物提取物,，定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白)...

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