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免疫(共)沉淀——命中注定我愛你,!

閱讀:3512      發(fā)布時間:2019-1-9
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愛必信absin免疫(共)沉淀(IP/CoIP)試劑盒(貨號:abs955),,現(xiàn)兩件6折100T僅需3000元,!截止2019年1月11日,。

免疫共沉淀(CoIP)是研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法,其基于抗體和蛋白的特異性親和作用,,通過捕獲與蛋白或抗原特異性結(jié)合的抗體,,進(jìn)而從復(fù)雜的樣品中捕獲及富集目標(biāo)蛋白,同時可以測定與之相互作用的蛋白或其它生物大分子,。

免疫沉淀(IP)則主要是利用抗體特異性反應(yīng)純化富集目的蛋白的一種方法,。

?

(互作蛋白A和B,與對應(yīng)抗體結(jié)合后,,再與偶聯(lián)beads的Protein A/G結(jié)合)

免疫(共)沉淀(IP/CoIP)主要實(shí)驗(yàn)流程見上圖:

(1)轉(zhuǎn)染表達(dá)目的蛋白的質(zhì)粒后,,后續(xù)主要是轉(zhuǎn)染表達(dá)目的蛋白的質(zhì)粒(2)對樣本的裂解處理,(3)蛋白和抗體,、珠子的孵育,,(4)免疫復(fù)合物沉淀洗滌之后,(5)再進(jìn)行后續(xù)分析,,常規(guī)是做WB,,也有用質(zhì)譜分析的。

可以看出,,CoIP本身的實(shí)驗(yàn)流程并不復(fù)雜,,只是為了拿到靠譜又漂亮的結(jié)果、需要我們不斷優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件,,包括裂解液的選擇,、抗體的選擇、Protein A與G的選擇和使用量,、beads的選擇等,。

小編收集了以下常見的免疫(共)沉淀需注意點(diǎn):

1.   細(xì)胞裂解采用溫和的裂解條件,不能破壞細(xì)胞內(nèi)存在的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用,多采用非離子變性劑(NP40 或Triton X-100),。每種細(xì)胞的裂解
      條件是不同的,,需要通過經(jīng)驗(yàn)和試驗(yàn)確定。不能用高濃度的變性劑(0.2%SDS),,細(xì)胞裂解液中要加各種酶抑制劑,。

2.  免疫(共)沉淀需要注意點(diǎn)就是抗體的性質(zhì)??贵w不同,、其和抗原的結(jié)合能力也不同,WB,、IHC能結(jié)合未必能用在IP反應(yīng),。建議仔細(xì)檢查抗體的
     說明書。特別是多抗的特異性是問題,。

3.  需充分考慮抗體/緩沖液的比例,。抗體過少則不能檢出抗原,,過多則不能沉降在beads上,,殘存在上清。緩沖劑太少則不能溶解抗原,,過多則抗原
     被稀釋,。

4.  如果拿到免疫復(fù)合物后用WB檢驗(yàn),必須在實(shí)驗(yàn)前預(yù)測目的蛋白是什么,,以選擇后檢測的抗體,,若預(yù)測不正確,實(shí)驗(yàn)就得不到結(jié)果,,實(shí)驗(yàn)本身具有
     冒險(xiǎn)性,。

 

那么做CoIP,我們需要拿到怎樣的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證結(jié)果,、從而有效證明我們的猜測呢,?

Figure from INMAP Overexpression Inhibits Cell Proliferation, Induces Genomic Instability and Functions through p53/p21 Pathways , Zhu Y et al.PLoS One. 2015 Jan 30;10(1)

 

上圖是CoIP驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)的典型結(jié)果圖片。INMAP是一個在有絲分裂中起重要作用的蛋白,,保證了紡錘體和端粒的完整性,,作者通過CoIP驗(yàn)證研究了INMAP通過P53/P21途徑起作用。

文章的C和D圖中,,研究者分別使用Flag單抗和p21抗體,,拉下目的蛋白及其互作蛋白后,通過Input的陽性,、control組normal lgG的陰性和終WB分析互作蛋白的陽性,,充分驗(yàn)證,、結(jié)論令人信服!

 

所以,,命中注定的愛情,、果然還是需要經(jīng)過層層考驗(yàn)驗(yàn)證吶!

 

愛必信作為一個致力于為中國科研事業(yè)服務(wù)的中國品牌,,我們開發(fā)的明星爆款產(chǎn)品免疫(共)沉淀(IP/CoIP)試劑盒采用蛋白特異結(jié)合能力*的ProteinA、ProteinG為捕獲載體,,目的蛋白捕獲能力高,,試驗(yàn)結(jié)果重復(fù)性和一致性均得到有效驗(yàn)證。

 

abs955 免疫(共)沉淀(IP/CoIP)試劑盒組分如下:

試劑組分包裝規(guī)格
Lysis buffer30ml*1
10*Wash buffer50ml*1
1*SDS 樣品緩沖液1ml*1
Protein A 瓊脂糖珠250μl*1
Protein G 瓊脂糖珠250μl*1

我們的產(chǎn)品優(yōu)勢:

1. 采用Protein A,、Protein G作為捕獲載體,,更加節(jié)省抗體;

3. 主要輔助試劑均包含在內(nèi),,一站式解決IP/CoIP實(shí)驗(yàn)煩惱,;

5. 高性價比,足夠?qū)嶒?yàn)50次,!

 2. 試劑盒內(nèi)組分及操作流程經(jīng)實(shí)驗(yàn)優(yōu)化,,確保更高的檢測靈敏度;
4. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)性好,;


目前愛必信免疫共沉淀試劑盒團(tuán)購*,、2件6折,截止2019年1月11日不要錯過哦,。

   貨號   產(chǎn)品名稱   規(guī)格   原價   *   貨期
   abs955   免疫(共)沉淀(IP/CoIP)試劑盒   50tests×2   2500×2   1500×2   現(xiàn)貨

 

愛必信特色產(chǎn)品線(全部現(xiàn)貨):
二抗,、標(biāo)簽抗體、對照抗體,;WB相關(guān):ECL發(fā)光液,、預(yù)染marker、預(yù)制膠,;IHC相關(guān):二抗試劑盒,、組化筆;IP/CoIP試劑盒,;細(xì)胞因子,、信號通路調(diào)節(jié)劑;血清,、BSA,、蛋白酶K、CTB,、TTX,、CEE,;凋亡試劑盒、呼吸爆發(fā)試劑盒,;動植物提取物,,定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白)...

 

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