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【愛(ài)必信實(shí)驗(yàn)小貼士】免疫組織化學(xué)

一,、定義：

細(xì)胞化學(xué),，是指帶顯色劑標(biāo)記的特異性抗體在組織細(xì)胞原位通過(guò)抗原抗體反應(yīng)和組織化學(xué)的呈色反應(yīng)，對(duì)相應(yīng)抗原進(jìn)行定性,、定位,、定量測(cè)定的一項(xiàng)新技術(shù)。

二,、分類(lèi)：

根據(jù)染色在整個(gè)制片中的位置分為：包埋前染色,、包埋后染色；

根據(jù)標(biāo)記物種類(lèi)分為：免疫熒光法,、免疫過(guò)氧化物酶法,、免疫鐵蛋白法、免疫膠體金法,；

按標(biāo)記物的位置分為：

    直接法：標(biāo)記物結(jié)合在直接與組織抗原發(fā)生免疫結(jié)合的特異性抗體,，即抗體上；

    間接法：標(biāo)記物通過(guò)其所標(biāo)記的非特異抗體,，即第二抗體間接地與抗體結(jié)合,；

    標(biāo)記物——抗體復(fù)合法。

三,、原理：

免疫組化染色是引入附有標(biāo)記物的外源性抗體（或抗原）,，使之錨定于組織或細(xì)胞標(biāo)本中相應(yīng)的抗原（或抗體）部位，標(biāo)記物經(jīng)呈色反應(yīng)而顯示待檢抗原（或抗體）,。

四,、主要過(guò)程：

1、脫蠟水化：

切片在脫蠟前,，放在APES（防止脫片用的,，缺點(diǎn)是有低毒性） 1：50 丙酮溶液中浸泡3分鐘,，晾干或60°C恒溫箱中烘烤20分鐘，然后將組織切片置于二甲苯中浸泡10min,，更換二甲苯再浸泡10min,，無(wú)水乙醇浸泡 10min，更換無(wú)水乙醇再浸泡10min,，然后依次95%乙醇,，70%乙醇，50%的乙醇各5min,，后用蒸餾水浸泡 5min,；

2、清洗：先用蒸餾水溫柔的沖洗一會(huì),，更換PBS沖洗5min,，再用PBS沖洗5min；

3,、抗原修復(fù)：

（1）微波爐加熱：適用于來(lái)源于人,、大鼠、小鼠的組織標(biāo)本,；來(lái)源于其他動(dòng)物種屬的組織標(biāo)本,；

（2）高壓熱修復(fù)：適用于較難檢測(cè)或核抗原的抗原修復(fù)；

（3）酶消化方法：適用于被固定遮蔽的抗原：包括 Collagen.GFAP. Complement. Cytokeratin.c-erB-2.LCA.LN.等,。

4,、封閉：用和二抗來(lái)源一致的血清在保濕盒中于37℃孵育15-30min,，然后甩去封閉用血清,；

5、一抗孵育：

滴加適當(dāng)比例稀釋的一抗,，將切片放在保濕盒中于4℃冰箱中過(guò)夜孵育或者溫箱37℃孵育1-2個(gè)小時(shí),。

6、清洗：過(guò)夜后的切片用PBS沖洗2,，沖洗3次,；

7、二抗孵育：

滴加標(biāo)記二抗在保濕盒中于37℃孵育30分鐘,。

8,、清洗：切片用PBS沖洗2min，沖洗3次,；

9,、顯色：加入顯色劑顯色，根據(jù)顯微鏡下的觀察決定終止顯色的時(shí)間一般都在3-10min左右,，常用5min,。

10,、沖洗：充分沖洗10-15min,

11、復(fù)染

12,、脫水透明

依次用50%,， 70%， 95%酒精各5min浸泡切片,，后用100%酒精浸泡10min,，更換酒精浸泡10min，后用二甲苯浸泡10分鐘,，更換二甲苯,，再浸泡10min；

13,、封片

撈出,，用樹(shù)脂封片，一滴/張,在其上蓋上小玻片封好的組織切片,，放入超凈臺(tái)中,，打開(kāi)抽風(fēng)，沖一段時(shí)間,，后把切片放在窗臺(tái)上涼2-3天,。

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活動(dòng)時(shí)間：8月15日 – 9月30日

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（1）非質(zhì)量問(wèn)題取消的訂單，不參加此活動(dòng),。        

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（3）本活動(dòng)以付款成功為準(zhǔn)。

愛(ài)必信特色產(chǎn)品線(xiàn)(全部現(xiàn)貨)：
二抗,、標(biāo)簽抗體,、對(duì)照抗體；WB相關(guān)：ECL發(fā)光液,、預(yù)染marker,、預(yù)制膠；IHC相關(guān)：二抗試劑盒,、組化筆,；IP/CoIP試劑盒；細(xì)胞因子、信號(hào)通路調(diào)節(jié)劑,；血清,、BSA、蛋白酶K,、CTB,、TTX、CEE,；凋亡試劑盒,、呼吸爆發(fā)試劑盒；動(dòng)植物提取物,，定制服務(wù)(抗體,、多肽)...