蛋白酶K在原位雜交技術(shù)中通常用于雜交前的處理,，它具有消化包圍靶DNA蛋白質(zhì)的作用,，以增加探針與靶核酸結(jié)合的機(jī)會，提高雜交信號.但蛋白酶K的濃度過高,、消化時(shí)間過長或孵育溫度過高時(shí),，都會對細(xì)胞的結(jié)構(gòu)有一定的破壞，導(dǎo)致組織切片的脫落,，細(xì)胞核的消失,，從而影響雜交結(jié)果。EDTA緩沖液可以替代蛋白酶K的作用,，解決上述出現(xiàn)的問題,，并能達(dá)到理想的染色效果。
蛋白酶K的應(yīng)用比較廣泛,，它可以消化包圍靶DNA蛋白,，因此使用蛋白酶K能夠增加探針 與靶核酸結(jié)合的機(jī)會增強(qiáng)雜交信號，但在使用蛋白酶K時(shí)要主要使用的濃度,，過高或者過低都會破壞細(xì)胞的結(jié)構(gòu),、核消失等影響試驗(yàn)結(jié)果。
蛋白酶K是一種切割活性較廣的絲氨酸蛋白酶,，它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽鍵,此酶經(jīng)純化去除了RNA酶和DNA酶活性,。由于蛋白酶K在尿素和SDS中穩(wěn)定,還具有降解天然蛋白質(zhì)的能力,因而它應(yīng)用很廣泛,包括制備脈沖電泳的染色體DNA,蛋白質(zhì)印跡以及去除DNA和RNA制備中的核酸酶,蛋白酶K的一般工作濃度是50—100μg/ml.在較廣的pH范圍內(nèi)(pH 4-12.5)均有活性。推薦反應(yīng)緩沖液：50mM Tris-HCl (pH7.5),10mM CaCl2 ,。
蛋白酶K配制標(biāo)準(zhǔn)：20mg/ml蛋白酶K配制標(biāo)準(zhǔn)(proteinase K)：將200mg的蛋白酶K加入到9.5ml水中,，輕輕搖動(dòng)，直至蛋白酶K*溶解,。不要渦旋混合,。加水定容到10ml，然后分裝成小份貯存于-20℃.蛋白酶K的保存：保存在-20℃冰箱里,，避免反復(fù)凍融,，有效保證12月.孵育溫度為55至65℃，理想孵育溫度為58℃,，孵育時(shí)間為15分鐘至48小時(shí);理想孵育時(shí)間為2小時(shí).
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