都說是封閉,，羊血清究竟封閉的是什么（抗原,？）那接下來加一抗怎么又能反應(yīng)結(jié)合？不是封閉了嗎,？
封閉的目的是為了減少非特異染色,。
這里，允許小編介紹下免疫組化中封閉血清的原理,，封閉血清的原理主要有兩點(diǎn)：
*是待檢樣本會(huì)非特異性的和蛋白結(jié)合,，從而導(dǎo)致背景過高，因此可以用BSA或血清封閉掉這部分非特異性的結(jié)合,，從這點(diǎn)看,，BSA和血清沒有明顯區(qū)別。
第二是待檢樣本中可能會(huì)有Fc受體,，可以和抗體恒定區(qū)結(jié)合,，與抗體特異性無關(guān)，封閉血清中有抗體,，因此用血清可以封閉掉一抗及二抗和樣本Fc受體之間結(jié)合,。BSA則無法封閉Fc受體。
所以二抗來源的動(dòng)物血清封閉的是組織上帶電荷基團(tuán),。因?yàn)榻M織中非抗原抗體反應(yīng)出現(xiàn)的非特異性背景染色，zui常見的原因是蛋白吸附于高電荷的膠元和結(jié)締組織成分上。這并不影響接下來一抗的結(jié)合,，因?yàn)檫@種結(jié)合是特異的,，親和力遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于因電荷作用的結(jié)合，因此會(huì)競爭勝出,。
免疫組化中用血清封閉的較多,。封閉血清一般選擇和二抗同一來源的（如一抗為兔來源多抗，二抗為山羊抗兔IgG,，那封閉液就用山羊血清）,，血清中動(dòng)物自身的抗體，預(yù)先能和組織中有交叉反應(yīng)的位點(diǎn)發(fā)生結(jié)合,，否則在后面的步驟中如果和二抗發(fā)生結(jié)合,，會(huì)造成背景。但要注意封閉用血清中不能含有目標(biāo)蛋白,，且與一抗來源不同,。另外二抗因盡量少選取兔子或老鼠來源的，因?yàn)檫@兩個(gè)在親緣關(guān)系上和人類非常接近,，所以產(chǎn)生交叉反應(yīng)的機(jī)會(huì)就比較大,，從而導(dǎo)致背景比較高。適合選用來源于驢,，山羊,，綿羊等的二抗，背景相對(duì)就很低,。
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