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支原體常規(guī)PCR檢測(cè)試劑盒（不含Taq酶）

10種常見支原體檢測(cè)限

支原體常規(guī)PCR檢測(cè)試劑盒（經(jīng)典法）（不含Taq酶）操作步驟

第1步：樣本處理

a. 細(xì)胞培養(yǎng)上清

b. 生物藥或需遵循藥典的樣本

說明：①樣品基質(zhì)可能會(huì)影響檢測(cè)的靈敏度。收集和篩選更高的樣品量可提高測(cè)定靈敏度,。

  ②細(xì)胞培養(yǎng)物樣本含豐富的DNA酶,，在低溫下也能降解支原DNA，影響檢測(cè)靈敏度,。

建議：樣本做DNA抽提處理,，實(shí)現(xiàn)高靈敏度。

推薦：德國(guó)MB公司生產(chǎn)的支原體DNA提取試劑盒,，Venor® Gem Sample Preparation Kit,。該DNA抽提試        劑盒已經(jīng)過廣泛驗(yàn)證。

第2步：試劑制備

第3步：PCR體系建立

a. 細(xì)胞培養(yǎng)上清

b. 生物藥或需遵循藥典的樣本

第4步：?jiǎn)?dòng)PCR反應(yīng)

第5步：電泳結(jié)果分析

191bp為內(nèi)控對(duì)照條帶,，表明PCR反應(yīng)正常,。

當(dāng)樣本存在支原體污染時(shí)，由于內(nèi)控對(duì)照與支原體DNA存在競(jìng)爭(zhēng),，內(nèi)控對(duì)照條帶變?nèi)酰ɡ缰гwDNA＞103拷貝）,。

陽性對(duì)照中支原體DNA＞104拷貝，內(nèi)控對(duì)照條帶會(huì)*消失,。

可能在80-90bp存在引物自退火形成的條帶,，此條帶不影響檢測(cè)結(jié)果。

如果待測(cè)樣本對(duì)PCR產(chǎn)生抑制,，則內(nèi)控對(duì)照條帶變?nèi)酰ê完幮詫?duì)照相比）,，此時(shí)應(yīng)先進(jìn)行DNA抽提（推薦使用：Venor® Gem Sample Preparation Kit 支原體DNA抽提試劑盒,，然后再檢測(cè)。