在生物制品和細胞治療產(chǎn)品的質量控制中,，支原體檢測是重要的一環(huán),。傳統(tǒng)的支原體檢測方法包括培養(yǎng)法和DNA染色法，然而,，隨著技術的進步,，核酸擴增技術（NAT）因其快速、靈敏和便捷的特點,，逐漸受到行業(yè)內的青睞,。NAT法在藥典中的使用并非毫無限制，其檢測限的設定,，成為了一個重要的考量因素,。
NAT法檢測限的設定背景
NAT法，如聚合酶鏈反應（PCR）和實時熒光定量PCR（qPCR）,，通過擴增支原體的特定核酸序列進行檢測,。這種方法相較于傳統(tǒng)的培養(yǎng)法和DNA染色法，具有更高的靈敏度和更短的檢測周期,。然而,，靈敏度的提升也帶來了更高的假陽性風險，因此,，在藥典中設定合理的檢測限顯得尤為重要,。
DNA染色法與培養(yǎng)法的差異
DNA染色法，通常使用熒光染料標記支原體DNA，通過觀察熒光信號來判斷支原體的存在,。這種方法雖然比培養(yǎng)法更快速,，但其靈敏度相對較低，且容易受到其他DNA的干擾,。因此,，當NAT法替代DNA染色法時，需要更高的檢測限以確保檢測的準確性,。
培養(yǎng)法則是通過培養(yǎng)支原體菌落來觀察其生長情況,，從而判斷支原體的存在。這種方法雖然準確,，但耗時較長,，且對實驗條件要求較高。因此,，當NAT法替代培養(yǎng)法時,，其檢測限可以相對較低，因為NAT法具有更高的靈敏度,，可以在更短的時間內檢測到更少的支原體,。
NAT法檢測限的具體設定
根據(jù)歐洲藥典的規(guī)定，當NAT法替代培養(yǎng)法時,，其檢測限需達到10CFU/ml,；而當NAT法替代DNA染色法時，其檢測限則需達到100CFU/ml,。這一設定是基于對不同方法靈敏度和特異性的綜合考慮。
對于培養(yǎng)法而言,，10CFU/ml的檢測限已經(jīng)足夠靈敏,，可以確保在大多數(shù)情況下檢測到支原體的存在。而對于DNA染色法,，由于其靈敏度相對較低,，因此需要將NAT法的靈敏度調整至100CFU/ml來確保檢測的準確性。
NAT法檢測限的驗證
為了確保NAT法檢測限的準確性,，需要進行嚴格的驗證,。這包括使用標準品進行靈敏度測試，以及與傳統(tǒng)方法進行對比實驗,。標準品通常包含已知數(shù)量的滅活支原體,，可以用于評估NAT法的檢測靈敏度。同時,，與傳統(tǒng)方法的對比實驗可以確保NAT法的檢測靈敏度不低于傳統(tǒng)方法,。德國MB公司的10CFU和100CFU的靈敏度標準品，為許多科研用戶在支原體檢測方法學驗證方面，提供了可靠的幫助,。
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