在細胞培養(yǎng)過程中，支原體污染是一個常見且棘手的問題,。支原體是一種介于細菌和病毒之間的原核生物,，形態(tài)多樣，沒有細胞壁,，且能夠直接穿過常規(guī)的除菌濾膜,，因此極易造成細胞培養(yǎng)污染。支原體污染不僅會影響細胞的正常生長和代謝,，還可能改變細胞的基因表達,，干擾實驗結(jié)果，甚至導(dǎo)致實驗失敗,。
一般情況下,，細胞感染支原體，我們建議直接丟棄并對環(huán)境進行消毒處理,，但總有一些特殊情況,，導(dǎo)致我們不能丟棄辛苦培養(yǎng)的細胞，這時就可以派細胞用支原體祛除試劑上場了,。
1,、對于已發(fā)生支原體污染的細胞，不愿隨意丟棄,，希望繼續(xù)培養(yǎng)時,，可選擇Zell Shield®細胞支原體祛除試劑（貨號：13-0050/13-0150）。
如已轉(zhuǎn)染或大量擴增的細胞等情況,，需要對已被支原體污染的細胞進行拯救,。使用含有復(fù)合抗生素成分的Zell Shield®細胞支原體祛除試劑，可以抑制支原體蛋白和DNA合成,，同時對細菌和真菌也有抑制作用,。
先使用廠家推薦的“懸浮沖洗法"處理好細胞，再使用加了Zell Shield®細胞支原體祛除試劑的培養(yǎng)基養(yǎng)細胞,，按照使用說明進行操作,，使用Zell Shield®細胞支原體祛除試劑培養(yǎng)4代后，細胞中的支原體即可祛除,。
懸浮沖洗法及試劑使用方法：
（1）消化細胞：將培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中的細胞消化下來。
（2）離心：將消化好的細胞寄培養(yǎng)液轉(zhuǎn)移至離心管中，進行常規(guī)離心,。
（3）清洗細胞：棄上清后,，用無菌PBS輕柔吹打清洗細胞。
（4）重復(fù)清洗：將PBS和細胞的混合物進行低速離心,，棄上清并重復(fù)清洗3次.
（5）重新培養(yǎng)：最后一次清洗結(jié)束后,，棄掉PBS上清液，加入含有Zell Shield®細胞支原體祛除試劑的新鮮培養(yǎng)基進行培養(yǎng),，4代后,，細胞中的支原體即可祛除。
2,、對于無法長期培養(yǎng)的珍貴樣本或病毒收獲液,，則可以使用德國MB公司的Mynox®珍貴生物樣品支原體清除試劑（貨號: 10-0200/ 10-0500/ 10-1000）。
該試劑含有「治療液」和「鞏固防護液」,?！钢委熞骸箒碜钥莶輻U菌提取物，可特異性地與支原體膜結(jié)合,，改變支原體膜通透性,，從而使支原體在2-3小時內(nèi)破潰死亡；「鞏固防護液」加入培養(yǎng)基,，后續(xù)培養(yǎng)一個月,，細胞將會清除支原體的污染，確切有效,。
使用方法：
（1）細胞重新傳代時,，用含Mynox®珍貴生物樣品支原體清除試劑、5%FBS的的培養(yǎng)基替換原有培養(yǎng)基,，對細胞進行培養(yǎng),。
（2）孵育培養(yǎng)2-3小時。
（3）對細胞進行換液,。
（4）用不含Mynox®的正常培養(yǎng)基（原始培養(yǎng)條件）對細胞進行培養(yǎng),，傳代3-4次。
（5）可對細胞進行支原體檢測,，觀察細胞狀態(tài),。
3、對于可以培養(yǎng)超過一個月的珍貴細胞株,，如果需要對其進行祛除支原體的處理,，可以使用德國MB公司的Mynox® Gold珍貴細胞株支原體清除試劑（貨號：10-0201/ 10-0501/ 10-1001）。
該試劑分為直接殺除+鞏固防護兩步處理,，祛除支原體的同時,，可進一步在后續(xù)培養(yǎng)中鞏固清除效果,，防止支原體“卷土重來"。
使用方法：
（1）治療液與含5%FBS的培養(yǎng)及混合
（2）將混合后的治療液添加至培養(yǎng)皿中
（3）將接種細胞
（4）培養(yǎng)細胞至80%-90%匯合后,，進行傳代
（5）傳代的同時加入鞏固液
重復(fù)（4）（5）兩次
（6）在無Mynox® Gold的情況下傳代
（7）用Venor® Gem支原體檢測試劑盒檢測
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