上皮細胞是抵御病原體入侵的主要防線,。然而,細菌病原體具有破壞這一屏障并促進細菌遷移的能力,。然而,,結(jié)核分枝桿菌(M.tb)在這一過程中所采用的具體分子機制尚不清楚。
在吸入氣溶膠顆粒后,,細菌往往在肺部形成持續(xù)感染,,導(dǎo)致特征性肺結(jié)核綜合征的發(fā)展。此外,,結(jié)核分枝桿菌可以突破肺泡屏障,,從而引發(fā)肺外結(jié)核。結(jié)核分枝桿菌的發(fā)病機制嚴(yán)重依賴于全身傳播,,盡管其確切的潛在機制尚未闡明,。
肺泡上皮屏障由緊密連接和粘附連接組成,在抵御病原體入侵方面起著重要的作用,。在近日發(fā)表的一項研究中,,科研人員提出了,關(guān)于結(jié)核分枝桿菌胞外絲氨酸蛋白酶Rv2569c的重大發(fā)現(xiàn),,該酶通過e -鈣粘蛋白的裂解促進細菌的轉(zhuǎn)運,。文章標(biāo)題為:“Serine protease Rv2569c facilitates transmission of Mycobacterium tuberculosis via disrupting the epithelial barrier by cleaving E-cadherin"
實驗結(jié)論:
科研人員通過評估Rv2569c切割e -鈣粘蛋白的能力,來研究Rv2569c在結(jié)核分枝桿菌易位中的作用,。e -鈣粘蛋白是細胞-細胞粘附連接的重要組成部分,,在細菌入侵期間被破壞。利用在大腸桿菌中表達并通過親和層析純化的重組Rv2569c,實驗證明了Rv2569c具有細胞壁相關(guān)絲氨酸蛋白酶活性,。
此外,,Rv2569c能夠降解一系列蛋白質(zhì)底物,包括酪蛋白,、纖維蛋白原,、纖維連接蛋白和e -鈣粘蛋白。
科研人員還確定了Rv2569c蛋白酶活性的適宜條件是溫度為37℃,,pH為9.0,MgCl2存在,。為了研究Rv2569c在結(jié)核分枝桿菌中的功能,科研人員制備了Rv2569c的缺失突變體及其補充菌株,,并將其用于感染A549細胞和小鼠,。
A549細胞感染實驗結(jié)果顯示,Rv2569c具有裂解E-cadherin的能力,,促進M.tb通過極化的A549上皮細胞層遷移,。此外,體內(nèi)感染實驗表明,,Rv2569c可以破壞E-cadherin,,增強M.tb的定植,并在C57BL/6小鼠的肺部引起病理損傷,。
總之,,這些結(jié)果強烈表明結(jié)核分枝桿菌利用絲氨酸蛋白酶Rv2569c破壞上皮防御,并通過跨越上皮屏障促進其全身傳播,。
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本實驗中的細胞感染實驗,,用到了A549細胞系。A549細胞系是肺癌人類肺泡基底上皮細胞,,該實驗選擇Ausbian進口胎牛血清,,用于配制培養(yǎng)液。
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