細(xì)胞培養(yǎng)的成功與否直接關(guān)系到實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性。微生物污染是影響細(xì)胞培養(yǎng)健康的重要因素之一,。因此,，在實(shí)驗(yàn)室工作和細(xì)胞培養(yǎng)過程中，高效預(yù)防或清除微生物污染十分重要,。本期內(nèi)容,，一起來討論細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室中，預(yù)防,、清除微生物污染的好方法,。
一、如何預(yù)防細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中的微生物污染
1,、用科學(xué)有效的方法清潔實(shí)驗(yàn)環(huán)境
我們匯總了各大實(shí)驗(yàn)室的工作流程,，希望可以給各位科研工作者提供參考：
實(shí)驗(yàn)室環(huán)境定期清潔：定期使用 Mycoplasma-off™支原體祛除噴霧劑（或濕巾），對工作區(qū)域消殺（建議半個月一次,，但需根據(jù)細(xì)胞間實(shí)際使用頻率決定）,。
實(shí)驗(yàn)開始前的滅菌工作：每次實(shí)驗(yàn)開始前，和實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,，用紫外線對細(xì)胞間進(jìn)行照射消毒,，實(shí)驗(yàn)操作前用酒精或Mycoplasma-off™支原體祛除噴霧劑對操作人員的手套進(jìn)行噴涂消毒。
實(shí)驗(yàn)儀器的定期清潔：在水浴鍋或培養(yǎng)箱水槽的水中,，加入 0.5% 的 Water Shield™水槽支原體預(yù)防祛除試劑,，可確保一個月內(nèi)水源不會變成支原體、真菌或細(xì)菌的污染源,。液氮罐也應(yīng)定期用Mycoplasma-off™支原體祛除噴霧劑（或濕巾）進(jìn)底消殺,，并更換潔凈的液氮，（液氮罐中凍存的細(xì)胞發(fā)生支原體污染,，也會在液氮中引起污染的傳播）,。
2、選擇合格的實(shí)驗(yàn)試劑
生物學(xué)實(shí)驗(yàn)很大程度上依賴各類生物學(xué)試劑的支持,，其中,，胎牛血清作為一種十分常見的生物學(xué)試劑，在細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中發(fā)揮著重要作用,，可以維持細(xì)胞的生長和健康,。選擇高品質(zhì)的胎牛血清，能夠盡可能降低細(xì)胞污染的風(fēng)險。以實(shí)驗(yàn)室常用的Ausbian進(jìn)口胎牛血清為例,，通過經(jīng)7次加壓過濾,，最后3次為0.1 µm無菌過濾處理，通過嚴(yán)格的質(zhì)量檢測,，所有微生物檢測均為“未檢出",，有許多實(shí)驗(yàn)長期使用，為眾多科研用戶發(fā)布高水平文章提供支持,。
3,、嚴(yán)謹(jǐn)規(guī)范的實(shí)驗(yàn)操作
實(shí)驗(yàn)開始前：在正式進(jìn)入細(xì)胞間前，需要在緩沖隔離間佩戴好細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室專用的防護(hù)用具：口罩,、防護(hù)服,、鞋套等，開始實(shí)驗(yàn)前,，佩戴好手套。
實(shí)驗(yàn)進(jìn)行中：嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)室的規(guī)章制度進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作,，注意不要交叉污染試劑,，另外實(shí)驗(yàn)安全、實(shí)驗(yàn)垃圾的處理也要格外注意,。
實(shí)驗(yàn)結(jié)束后：用Mycoplasma-off™支原體祛除噴霧劑是所使用過的實(shí)驗(yàn)臺面,、物品表面進(jìn)行清潔。
二,、如何祛除細(xì)胞中的微生物污染
當(dāng)細(xì)胞被細(xì)菌,、真菌或是支原體污染后，都不建議繼續(xù)培養(yǎng),，盡量能夠直接銷毀,，并對實(shí)驗(yàn)環(huán)境進(jìn)行全面地清潔消毒。多數(shù)情況下,，被真菌或細(xì)菌污染的細(xì)胞,，“發(fā)病"迅速，還沒來得及拯救,，細(xì)胞就會集體“陣亡",。因此，如果細(xì)胞十分珍貴,，不能隨意丟棄,，也建議僅對支原體污染的細(xì)胞進(jìn)行拯救。
祛除細(xì)胞中支原體的有效方法：
1,、對于非常珍貴的細(xì)胞株（不可再得的）國際上使用 Mynox® Gold珍貴細(xì)胞株支原體清除試劑,，做 4 周左右的支原體祛除持續(xù)培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)。
2、對于非常珍貴的細(xì)胞株或生物樣品（無法長期培養(yǎng)的）,，可使用 Mynox®珍貴生物樣品支原體清除試劑,，對細(xì)胞做 3 小時左右的祛除支原體處理，處理完畢,，沖洗細(xì)胞,，將樣品放入潔凈的培養(yǎng)液中，重新培養(yǎng)或保存即可,。
3,、對于已經(jīng)進(jìn)行到中途的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，如果將培養(yǎng)的大量細(xì)胞丟棄,，會造成高昂的實(shí)驗(yàn)成本損失,。對于這樣的情況，補(bǔ)救辦法如下：在培養(yǎng)液中加入 10% 的 Zell Shield®細(xì)胞支原體祛除試劑（一種新型復(fù)合抗生素）,。按照廠家建議“懸浮沖洗"方法,，配合處理細(xì)胞，培養(yǎng) 4 代以上,，基本可祛除支原體污染,。
懸浮沖洗法：
細(xì)胞消化后，將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至離心管進(jìn)行離心,，棄上清,，加入PBS沖洗細(xì)胞后再次速離心棄上清，重復(fù)PBS沖洗過程3次后,，用新鮮的含Zell Shield®細(xì)胞支原體祛除試劑的細(xì)胞培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng)傳代
①Zell Shield®細(xì)胞支原體祛除試劑常規(guī)為-18℃保存,，建議使用前，先融化分裝,，仍舊-18℃避光保存,，使用時按需融化配制。避免反復(fù)凍融,。
②Zell Shield®細(xì)胞支原體祛除試劑按1:100濃度可直接加入培養(yǎng)基,。例如：500ml培養(yǎng)基中添加5ml Zell Shield®細(xì)胞支原體祛除試劑，50mL/瓶的Zell Shield®細(xì)胞支原體祛除試劑可供5L培養(yǎng)基使用,。
4,、一些做原代培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)室，為了預(yù)防取原代細(xì)胞過程中可能會發(fā)生支原體污染,，實(shí)驗(yàn)人員也可以在培養(yǎng)液中加入 10% 的 Zell Shield®（一種新型復(fù)合抗生素）,，培養(yǎng) 4 代以上，即可撤掉 Zell Shield®,，此過程可有效預(yù)防支原體污染的發(fā)生,。
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