在解凍胎牛血清之前,,需要做好準備工作,。首先,應(yīng)確保實驗室環(huán)境清潔,,避免污染,,可以使用紫外線照射無菌工作臺和實驗空間,同時配合使用實驗室微生物污染祛除類試劑,,比如德國Minerva Biolabs生產(chǎn)的Mycoplasma Off支原體祛除噴霧劑,,對實驗室進行清潔,,降低胎牛血清在解凍、分裝或使用過程中被污染的可能性,。其次,,準備好所需的實驗器材,如無菌移液管,、無菌試管,,并確保這些器材是嚴格無菌的。此外,,還需檢查胎牛血清的包裝是否完好無損,,如有破損或污染,則不應(yīng)使用,。
胎牛血清這種混合物中,,融化速度:蛋白質(zhì)等干物質(zhì)>水這類溶劑,所以蛋白質(zhì)會先溶解析出,,而水還是結(jié)成冰的狀態(tài),,導(dǎo)致瓶子中間會出現(xiàn)一根透明的冰柱,而周圍則會呈現(xiàn)上黃下紅的分層渾濁液的狀態(tài),,在使用過程中很容易引起沉淀,、混合不均勻、局部濃度過高等問題,,影響細胞生長,。
更重要的一點是,血清中珍貴的生長因子等活性物質(zhì),,它們在解凍過程中,,有著與細胞復(fù)蘇類似的經(jīng)歷,都需要快速解凍才能很大程度地保留生物活性,。顯然,,4℃過夜這樣的長時間處理,很有可能會導(dǎo)致一部分「營養(yǎng)成分」的損失,,影響細胞生長,。因此,正確的解凍方法,,應(yīng)該是盡可能讓胎牛血清所有成分同時融化,。
我們推薦使用更科學(xué)“三步法"對胎牛血清進行解凍。根據(jù)待解凍的胎牛血清的量不同,,按照下表中的建議時長與溫度對其進行處理。需要注意的是,,如果血清是儲存在-80℃冰箱中,,正式解凍前應(yīng)先轉(zhuǎn)移至-20℃冰箱中過渡,。
操作 | 溫度 | 100ml | 500ml | 1000ml |
步驟一 | 室溫 | 35 min | 90 min | 100 min |
或15-20℃水浴 | 5 min | 18 min | 20 min | |
步驟二 | 20℃水浴 | 15 min | 25 min | 30 min |
步驟三 | 37℃水浴 | 20 min | 35 min | 45 min |
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