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指示細胞培養(yǎng)法又稱為指示細胞法,、DNA染色法,，該方法的實驗思路是：

培養(yǎng)指示細胞-樣品上清液收集-上清液接種-染色觀察結果

具體包含以下幾個步驟：

將供試品接種于指示細胞（無污染的Vero 細胞或經(jīng)國家藥品檢定機構認可的其他細胞，供試品應對該細胞生長無影響。下面以Vero細胞為例）中培養(yǎng)后,，用特異熒光染料（如Hoechst 33258）染色,，支原體中的核酸也可以被著色，因此,，如果待檢測細胞中含有支原體,，那么就會導致指示細胞被感染，進而在細胞膜或培養(yǎng)基等處發(fā)現(xiàn)藍色熒光（支原體附著在細胞膜上,，也有可能游離在細胞培養(yǎng)基中）,。

指示細胞培養(yǎng)：將指示細胞復蘇、傳代,，調(diào)整至最佳狀態(tài),，留出適宜的量備用。

樣品上清液收集：無抗生素培養(yǎng)基中加入待檢測樣品后,，細胞需至少傳一代,，然后取細胞已長滿且3 天未換液的細胞培養(yǎng)上清液待檢。（為了對待檢測樣品中的支原體進行富集）

上清液接種：在制備好的指示細胞培養(yǎng)板中加入一定量的待檢細胞培養(yǎng)上清,，36°C培養(yǎng)3-5 天。指示細胞培養(yǎng)物至少傳代1 次,，末次傳代培養(yǎng)可用6孔板培養(yǎng)3-5 天,。

染色觀察：吸出培養(yǎng)孔中的培養(yǎng)液，加入固定液,，放置5分鐘,。吸出固定液后進行10min的二次固定，再次吸出固定液,，使蓋玻片在空氣中干燥,。加DNA 染料工作液5ml，加蓋,，室溫放置30分鐘,，漂洗3次，干燥,，封片,。用熒光顯微鏡觀察。

熒光顯微鏡下可見細胞表面或培養(yǎng)基中,，有大小不等,、不規(guī)則的藍色熒光著色顆粒，則說明有可能存在支原體污染,。

對于DNA染色法方法,，優(yōu)缺點很明顯的：

優(yōu)點：

1、適用于一些不易培養(yǎng)的支原體，如豬鼻支原體,，分離培養(yǎng)法對該支原體檢測并不可靠,，但可用DNA染色法準確地檢測出來。

2,、操作步驟雖然多,，但都相對簡單

3、靈敏度尚可,。

缺點：

1,、時間較長，從Vero細胞復蘇,、傳代,，再到收集上清后再次培養(yǎng)，有時甚至需要十幾天時間

2,、存在假陽性和假陰性的可能：如一些死亡細胞釋放出來的DNA會被染成藍色,，出現(xiàn)假陽性；或是由于熒光過若而出現(xiàn)假陰性使結果出現(xiàn)偏差,，因此使用這個方法需要一定的經(jīng)驗,。