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紫外可見近紅外分光光度計系數(shù)倍率法

系數(shù)倍率法

（1）系數(shù)倍率法儀器原理（見圖 12） 雙波長分光光度法中用等吸收點波長消除干

擾,，是測定兩組分體系的一個好方法。但是在干擾組分的吸收光譜中,，找不出等吸收點時,，

就不能用此法消除干擾。系數(shù)倍率法克服等吸收波長的局限性,。

系數(shù)倍率法在雙波長分光光度計中增加一個系數(shù)倍率器,，獲得差示信號與干

擾組分含量無關(guān)。

  ⊿A＝Aλ₂－K₁Aλ₁＝kC

       式中⊿A――差示吸光度值,；

       Aλ₂――樣品溶液在測量波長 λ₂ 處的總吸光度值,；

Aλ₁――樣品溶液在參比波長處的總吸光度值；

K₁ ――校正系數(shù),，通過 K₁ 校正扣除了干擾組分吸光度,；

K ――標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率；

C ――樣品溶液待測組分濃度,。

按著上述原理,，可用下式求 K₁ 系數(shù)。

因此，只要測出干擾組分在 λ₂ 和 λ₁ 處的吸光度值,，便求解 K₁,，實際上它是對干擾組

分的校正系數(shù)。K₁ 與干擾組分濃度無關(guān),，只與 λ₁ 位置有關(guān),。

圖 12：各種吸收光譜的組合及系數(shù)倍率法儀器示意圖

1－光源；2—單色器,；3—切光器,；4—吸收池；5—光電倍增管,；6—初級放大器,；

7—同步放大器；8—對數(shù)轉(zhuǎn)換器,；9—系數(shù)倍增器,；10—差算電路；11—數(shù)字電壓表

（2）舉例

①食品紅 2 號（R₂）和山梨酸的測定 由圖 13 可見,，為測定 R₂ 和山梨酸混合樣品兩

組分,，可選山梨酸的 λ_ma_x＝262 nm 為測定波長 λ₂，以 320 nm 為參比波長（λ₁）測定山梨酸

含量（Aλ₂> Aλ₁,，按 2－16 式求 K）,。而以 262 nm 和 240 nm 為組合波長測定食品紅 2 號（R₂）。

②復(fù)方黃連素注射液中甲氧芐氨嘧啶（TMP）含量的系數(shù)倍率法測定

硫酸氫黃連素 λ_ma_x＝344 nm,。TMP 的 λ_ma_x＝271 nm,，測：

⊿A₂7₁（TMP）＝A₂7₁－K•A₃44

釋成四種濃度，分別在 271nm 和 344nm 處測定吸光度,，并計算K值,。然后在 271nm 和 344nm

處測定樣品的吸光度值，求出⊿A₂1₁（TMP）,?？?/span>由標(biāo)準(zhǔn)對照法求出 TMP 含量。

③ 增效聯(lián)磺膠囊中三組分含量可用雙波長系數(shù)倍率法測定增效聯(lián)磺膠囊中含有磺胺

甲基異惡唑（SMZ）,、磺胺嘧啶（SD）和甲氧芐氨嘧啶（TMP）,。采用亞硝酸鈉法測定

 該品中 SMZ、SD 的磺胺總量和提取分光光度測定 TMP 的含量,，操作較繁,。姚桂棣等

用系數(shù)倍率法,，并借助微機，可不經(jīng)分離直接測定各自的含量^[9^],。

分別配制成 SMZ,、SD 的乙醇溶液 10ug/ml 和 TMP 的乙醇溶液 4ug/ml 作對照液。然

后配制模擬樣品溶液：準(zhǔn)確稱取 SD,、SMZ10mg,，放入 100ml 容量瓶中，加 TMP 乙醇對照

溶液 20ml,，用乙醇稀至刻度,，取此液中 0.1mol/1HCl 稀釋 10 倍，然后,，以 0.1mol/1HCl 為

參比,，對上述對照液和模擬樣品液，以⊿λ0.5nm 間隔,，從 300－220nm 掃描,，求得吸光度值，

經(jīng)微機處理選出測點：SMZλ₂4₃/λ₂6₅,，K＝2.267,；SDλ₂3₆/λ₂4₂，K＝1.5381,；TMPλ₂40.₅/λ₂5₀，

K＝1.1291,。以⊿A＝A₁－KA₂ 為縱坐標(biāo),，λ 為橫坐標(biāo)作圖（見圖 15）。當(dāng)以 236nm 為測定波

長,，則⊿A 只與 SD 濃度有關(guān),，可測定之。同理可測定 SMZ 和 TMP,。增效聯(lián)磺膠囊同樣配

成乙醇溶液,，將樣品液和對照液在 λ₂3₆/λ₂4₂、λ₂4₃/λ₂6₅,、λ₂40.₅/λ₂5₀ 處測其吸光度值,，并計算各

組分含量。

紫外可見近紅外分光光度計系數(shù)倍率法