超微量分光光度計有哪些用處,?
1,、核酸的定量
核酸的定量是超微量分光光度計使用頻率最高的功能,。可以定量溶于緩沖液的寡核苷酸,,單鏈,、雙鏈DNA,以及RNA,。核酸的最高吸收峰的吸收波長260 nm,。每種核酸的分子構成不一,因此其換算系數(shù)不同,。定量不同類型的核酸,,事先要選擇對應的系數(shù)。測試后的吸光值經過上述系數(shù)的換算,,從而得出相應的樣品濃度,。
2、蛋白質定量
1)直接定量:這種方法是在280nm波長,,直接測試蛋白,。超微量分光光度計可以直接顯示出樣品的濃度,或者是選擇相應的換算方法,,將吸光值轉換為樣品濃度,。由于緩沖液中存在一些雜質,一般要消除320nm 的"背景"信息,,設定此功能"開",。與測試核酸類似,要求A280的吸光值大于0.1A,,最佳的線性范圍在1.0-1.5 之間,。蛋白質直接定量方法,適合測試較純凈,、成分相對單一的蛋白質,。紫外直接定量法相對于比色法來說,速度快,,操作簡單;但是容易受到平行物質的干擾,,如DNA的干擾;另外敏感度低,,要求蛋白的濃度較高。
2)比色法蛋白質定量(顏色反應)
蛋白質比色法測定的基礎是蛋白質構成成分:氨基酸與外加的顯色基團或者染料反應,,產生有色物質,。有色物質的濃度與蛋白質反應的氨基酸數(shù)目直接相關,從而反應蛋白質濃度,。
比色方法一般有BCA,,Bradford,Lowry 等幾種方法,。
由于各種方法反應的基團以及顯色基團不一,,所以同時使用幾種方法對同一樣品得出的樣品濃度無可比性。所以在選擇比色法之前,,最好是參照要測試的樣本的化學構成,,尋找化學構成類似的標準蛋白作標準品。
3,、細菌細胞密度(OD600)
實驗室確定細菌生長密度和生長期,,多根據(jù)經驗和目測推斷細菌的生長密度。在遇到要求較高的實驗,,需要采用分光光度計準確測定細菌細胞密度,。通過檢測600nm處細胞生長培養(yǎng)的吸光度,從而監(jiān)測微生物或其他細胞培養(yǎng)的生長率,。OD600是追蹤液體培養(yǎng)物中微生物生長的標準方法,。實驗中偶爾會出現(xiàn)菌液的OD值出現(xiàn)負值,原因是采用了顯色的培養(yǎng)基,,即細菌培養(yǎng)一段時間后,,與培養(yǎng)基反應,發(fā)生變色反應,。