產(chǎn)品名稱：貓腎細(xì)胞;CRFK

規(guī)格：1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶
貨號(hào)：YS-02X9579

細(xì)胞生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn) ：細(xì)胞生長(zhǎng)良好，形態(tài)正常

儲(chǔ)存條件：2℃-8℃,，避光儲(chǔ)存

運(yùn)輸條件：冰袋冷藏運(yùn)輸
公司產(chǎn)品僅用于科研

細(xì)胞培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備RPMI-1640 培養(yǎng)基,；優(yōu)質(zhì)胎牛血清,，10%,；Glutamax（invitrogen 35050061）,，1%；Sodium pyruvate（invitrogen 11360070）,，1%,；雙抗，1%,。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%,；二氧化碳,，5%。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配,。

二． 細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入250px皿中,，加入約8ml培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

注意事項(xiàng)：

（1）凍存前細(xì)胞狀態(tài),，細(xì)胞最好在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,，細(xì)胞密度適合，剛剛發(fā)生細(xì)胞融合,，過(guò)密或連成片的細(xì)胞狀態(tài)不好,，而且消化時(shí)不容易分散；

（2）凍存的密度不宜過(guò)低,，10的6次方-7次方的數(shù)量級(jí)比較好,，我凍存的細(xì)胞一般T25培養(yǎng)瓶（5*107），一瓶?jī)鲆还埽?.5ml凍存管）,，10cm培養(yǎng)皿（大概10的8次方個(gè)細(xì)胞）分成兩管,。

（3）消化和吹打，切忌胰酶消化過(guò)度,，吹打不可太用力,，最好不要吹出好多泡泡。消化后立即加入*培養(yǎng)基吹打哦,，不是加入凍存液再吹打,。

（4）離心后加入凍存液。凍存液中FBS的用量對(duì)于腫瘤細(xì)胞株而言要求不是很嚴(yán)格,，我從10%-90%都用過(guò),，問(wèn)題不大，個(gè)人認(rèn)為10%-20%可以了,，能節(jié)約處就節(jié)約點(diǎn)嘛,！另外，凍存液可以在處理細(xì)胞前配置,，放在4度冰箱預(yù)冷,。細(xì)胞離心后直接用預(yù)冷的凍存液重懸，移入凍存管,。

（5）關(guān)于“慢凍",，傳統(tǒng)的方法,，LLC細(xì)胞凍存管用棉花包好，4度2h,，-20度2h或更長(zhǎng),，-80度過(guò)夜，最后液氮,。對(duì)于條件較好的實(shí)驗(yàn)室和細(xì)胞凍存數(shù)量多的實(shí)驗(yàn)室,，推薦使用程序降溫盒，內(nèi)裝異丙醇,，在-80度并內(nèi)可以逐漸降溫,，很方便，省了包棉花,、4度,、-20度了。

使用步驟：

一）準(zhǔn)確稱量試劑：根據(jù)不同的菌類和用途,，選擇適宜的培養(yǎng)基,，培養(yǎng)基所需試劑必須純凈。

（二）校正pH值：將稱量好的培養(yǎng)基各種成分放入容器內(nèi),，標(biāo)記劃線,，加熱溶解，補(bǔ)充水分,，測(cè)定酸堿度,，常用pH6.8～8.0的精密試紙或酸度計(jì)測(cè)定。用1N NaOH和1N HCl調(diào)節(jié)pH值到適宜范圍內(nèi),。

（三）過(guò)濾：將玻璃漏斗置鐵架上,，再用人子宮成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基紗布夾棉花或用濾紙放在漏斗中，將上述培養(yǎng)基倒入其中過(guò)濾至透明,。

（四）分裝：將過(guò)濾后的培養(yǎng)基分裝于中試管或三角瓶?jī)?nèi)（試管內(nèi)每支裝5mL,；三角瓶中裝100～150ml），塞好棉塞用牛皮紙包扎好,，準(zhǔn)備滅菌,。

（五）滅菌：培養(yǎng)基的滅菌，常用高壓蒸汽滅菌法,。一般微生物的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞在水中煮沸后即被殺死,，但細(xì)菌的芽胞有較強(qiáng)的抗熱性，須經(jīng)高壓蒸汽滅菌才能達(dá)到*滅菌的目的,。根據(jù)蒸汽溫度隨壓力升高而上升的原理，即壓力越大,，蒸汽溫度就越高,。因此,，在同一溫度條件下，采用高壓蒸汽滅菌比干熱滅菌法效果要好,。而且在濕熱情況下,，菌體吸收水分后，其蛋白質(zhì)易于凝固變性,，因?yàn)檎羝拇┩噶?qiáng),，殺菌效果好。

細(xì)胞特性：

1)】組織來(lái)源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的正常眼組織,。

2)細(xì)胞鑒定：細(xì)胞免疫熒光染色為陽(yáng)性,。

3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。

4)不含有 HIV-1,、 HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌。

5)細(xì)胞生長(zhǎng)方式：上皮樣,，不規(guī)則細(xì)胞,，貼壁培養(yǎng)。
Plectin/FITC 熒光素標(biāo)記網(wǎng)蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rat IgG (親和純化) 大鼠IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 1mg

高遷移率族蛋白-1抗體  HMGB1 0.1ml

Goat  Guinea pig IgG 羊抗豚鼠IgG 1mg

FGF8 英文名稱： 成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子8抗體 0.1ml

Rhesus antibody Rh Phospho-RelB(Ser573) 磷酸化核轉(zhuǎn)錄因子NFKB-RelB蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml

Rat IgG (親和純化) 大鼠IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 1mg

HSP-90 Alpha(Heat Shock Protein 90 Alpha ) 熱休克蛋白90α抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

 phospho-c-Abl(Tyr204) 磷酸化非受體酪氨酸激酶c-Abl抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh phospho-CHEK1 (Ser280) 磷酸化細(xì)胞周期檢測(cè)點(diǎn)激酶1抗體 規(guī)格 0.1ml

兔抗豬IgG血清 0.5ml 國(guó)產(chǎn)

Wnt11 英文名稱： 信號(hào)通路Wnt11抗體 0.1ml

Phospho-Doublecortin (Ser128) 英文名稱： 磷酸化雙皮質(zhì)素抗體 0.1ml

 phospho-c-Abl(Tyr204) 磷酸化非受體酪氨酸激酶c-Abl抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

synaptotagmin-2 英文名稱： 突觸結(jié)合蛋白相關(guān)基因2抗體 0.1ml

phospho-MEK1 + MEK2 (Ser222 + Ser226) 英文名稱： 磷酸化原活化蛋白激酶1抗體 0.1ml

CD3抗體  CD3 0.1ml

 VDCC-L Beta/FITC 熒光素標(biāo)記L-型電壓依賴型鈣通道β抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-GSK3 alpha(Ser21) 磷酸化葡萄糖合成激酶3α抗體 GSK3α(Phospho-Ser21) 規(guī)格 0.1ml

CD62L (ELAM-1/L-Selectin ) L選擇素抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg
貓腎細(xì)胞;CRFK巖藻糖,；L-巖藻糖卷柏(墊狀卷柏）PH4-5顯色（BROMOCRESOL GREEN）指示溶液

果膠酶麥芽PH5-6顯色（CHLOROPHENOL RED）指示溶液

β-淀粉酶(70萬(wàn)u/ml液體)花椒PH6-7顯色（BROMOTHYMOL BLUE）指示溶液

β-淀粉酶(酶活5萬(wàn)粉末)蘆根PH7-8顯色（PHENOL RED）指示溶液

DNA酶,脫氧核糖核酸酶Ⅰ扶芳藤PH8-9顯色（THYMOL BLUE）指示溶液

高峰淀粉酶來(lái)源于米曲霉(4000U/g)伸筋草PH9-10顯色（THYMOLPHTHALEIN）指示溶液

高峰淀粉酶來(lái)源于米曲霉(100U/mg )雞冠花P11-12顯色（SULFO ORANGE）指示溶液

甘油-3-磷酸脫氫酶苦楝皮（楝）線蟲繁殖培養(yǎng)試劑盒