實(shí)驗(yàn)過程：
一,、絲狀支原體簇探針法熒光定量PCR試劑盒試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．產(chǎn)品僅用于科研對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中,，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,，而不能從無到有，憑空合成,。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物,。可以是DNA也可以是RNA,，一般20多bp,，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP,、dCTP、dGTP,、dTTP各2mM
5．Taq酶
二,、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中,。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μl
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
     加ddH2O至               50 μl
     視PCR儀有無熱蓋,，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序,。將上述混合液稍加離心,，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增,。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,，循環(huán)30-35次,，后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng),，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存,。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,，以除去石蠟油,；否則，直接取5-10μl電泳檢測,。
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：絲狀支原體簇探針法熒光定量PCR試劑盒
英文名稱：Mycoplasma mycoides cluster
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點(diǎn)：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品,。
運(yùn)輸及保存
低溫運(yùn)輸，-20℃保存,，保存期限一年,。
自備試劑
DNA模板、10×ROX（根據(jù)機(jī)型決定,，具體見使用方法）,。
本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

?
產(chǎn)品及特點(diǎn)：
1. 即開即用,，用戶只需要提供病毒樣品,。
2. 根據(jù)鮑皰疹樣病毒探針法熒光定量保守序列設(shè)計(jì)的專一性引物，與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng),。
3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng),。
4. 一管式熒光定量PCR檢測，避免后續(xù)污染,。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應(yīng)體系的熒光定量PCR,。
以下是公司正在熱銷的產(chǎn)品：
99%100g5g3O阿魏酰奎尼693890utrophin

枸櫞己定 訂購|咨詢 規(guī)格： 50mg 人連環(huán)蛋白β1(Catenin beta-1)ELISA試劑盒人96T0.312-20 ng/mL小鼠Toll樣受體9(TLR-9/CD289)ELISA試劑盒,，英文名：TLR-9/CD289 ELISA Kit

Ⅰ型膠原(COL1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)重組人 HCST / DAP10 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)*250(g)

人轉(zhuǎn)化生長子α（TGFα） BTNL3  嗜乳脂蛋白樣3抗體規(guī)格:96T/48T規(guī)格:250mgCXC趨化子受體2檢測試盒20mg人骨肉瘤細(xì)胞,，SJSA1細(xì)胞1x10^6cells

99%500g50g4O阿魏酰奎尼142290Dystrophin Associated Glycoprotein 1

熊果苷 訂購|咨詢 規(guī)格： HPLC≥98%,，20mg/vial 化KLF5抗體 NαA16 ELISA Kit N-α-乙酰轉(zhuǎn)移酶16(NαA16)ELISA試劑盒

中性粒細(xì)胞明膠酶關(guān)聯(lián)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(NGAL)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)重組人 EEF1E1 / AIMP3 / p18 蛋白 (His 標(biāo)簽)*250(g)

8epiPGF2 Alpha(Human 8epiprostaglandin F2alpha0 ELISA Kit  人8異構(gòu)前列腺素F2αCAS號(hào)：944糞卟啉原Ⅲ檢測試盒10kuHuman/人Elisa試盒3058397

5羧基四基羅丹明琥珀酰亞（單一化合物）5mg

異牡荊素(標(biāo)準(zhǔn)品) 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,，標(biāo)準(zhǔn)品 Isovitexin 洋蔥假單胞菌 Pseudomonas cepacia釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae

AGEs (advanced glycosylation end products)  晚期糖基化終末產(chǎn)物蛋白進(jìn)口、原裝GRO;KC檢測試盒5gHuman/人Elisa試盒4867372

5羧基四基羅丹明琥珀酰亞（單一化合物）5mg

輪環(huán)藤堿;Cycleanine 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢 KG-1(人急性骨髓性白血病細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

AGEs control article(advanced glycosylation end products control article)  晚期糖基化終末產(chǎn)物蛋白對(duì)照品現(xiàn)貨供應(yīng)β羥丁檢測試盒100gHuman/人Elisa試盒4867372

5(6)羧基四基羅丹明琥珀酰亞（混合物）5mg

環(huán)維黃楊星D  英文名稱：Huan Weihuang young star D   保存：-20℃   規(guī)格：20mg 胞質(zhì)分裂調(diào)控蛋白1抗體

Peptone from Casein250抑制性IgG受體檢測試盒5mg17羥皮質(zhì)類固醇檢測試盒25DihydroxyvitaminD3
絲狀支原體簇探針法熒光定量PCR試劑盒抗壞血(維生素C);純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有 CAS號(hào)： 50817 規(guī)格： 0.25g 訂購|咨詢

;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書 CAS號(hào)： 532321 規(guī)格： 0.25g 訂購|咨詢

山梨;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書 CAS號(hào)： 24634615,，590001 規(guī)格： 0.25g 訂購|咨詢

反式異香;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證 CAS號(hào)： 93163 規(guī)格： 0.5g 訂購|咨詢

維生素A（醋）;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證 CAS號(hào)： 127479 規(guī)格： 0.1g 訂購|咨詢

;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書 CAS號(hào)： 29102 規(guī)格： 1g 訂購|咨詢

D甘露糖;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書 CAS號(hào)： 69658 規(guī)格： 0.25g 訂購|咨詢

過氧酰;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書 CAS號(hào)： 94360 規(guī)格： 0.1g 訂購|咨詢

叔對(duì)二;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品TBHQ CAS號(hào)： 1948330 規(guī)格： 0.25g 訂購|咨詢

L谷氨酰;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書 CAS號(hào)： 56859 規(guī)格： 0.1g 訂購|咨詢

a乳糖;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書 CAS號(hào)： 5989811 規(guī)格： 0.25g 訂購|咨詢

D山梨;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書 CAS號(hào)： 50704 規(guī)格： 0.25g 訂購|咨詢

鈣;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書 CAS號(hào)： 4075814 規(guī)格： 0.1g 訂購|咨詢

安賽蜜;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書 CAS號(hào)： 55589623 規(guī)格： 0.25g 訂購|咨詢

鞣花;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書 CAS號(hào)： 314041082 規(guī)格： 0.1g 訂購|咨詢
使用方法：
一,、稀釋PCR陽性對(duì)照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）,。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對(duì)照,，只提供可以直接使用的DN段作為陽性對(duì)照,。
2. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為7,，6,，5，4,，3,，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR模板稀釋液（用帶芯槍頭,，下同）,。
4. 在7號(hào)管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對(duì)照，充分震蕩1分鐘,，得1×10E7拷貝/μL的陽性對(duì)照,。放冰上待用。
5. 換槍頭,，在6號(hào)管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得),，充分震蕩1分鐘,，得1×10E6拷貝/μL的陽性對(duì)照。放冰上待用,。
6. 換槍頭,，在5號(hào)管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對(duì)照到5號(hào)管中，充分震蕩1分鐘,，得1×10E5拷貝/μL的陽性對(duì)照,。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照,。放冰上待用,。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個(gè)樣品,，必須設(shè)置N+2個(gè)提取,，多出的一個(gè)是PC（樣品制備陽性對(duì)照），一個(gè)是NC（樣品制備陰性對(duì)照）,?？梢杂?0μL上步制備的PCR陽性對(duì)照的第4號(hào)（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于1萬拷貝）或第5號(hào)（濃度為1×10E5 拷貝/μL,，10μL相當(dāng)于10萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,，以此作為PC。另外用水作為NC,。如果每次制備需要200μL樣品,，則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA,，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容,。
三、設(shè)置qPCR反應(yīng)（20 μL體系,，在樣品制備室進(jìn)行）
10. 如果只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管,，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品,，1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照，6個(gè)用于PCR陽性對(duì)照,。如果做2-3次重復(fù),，則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。
11. 在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù),。樣品管和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對(duì)照,，并且陽性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好。