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供貨周期 | 現貨 | 應用領域 | 化工,生物產業(yè) |
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主要用途 | 僅供科研實驗 | 英文名稱 | Recombinant Dicer 1, Ribonuclease Type III (DICER1 |
種屬 | Homo sapiens (Human,人) | 規(guī)格 | 10μg50μg200μg1mg5mg |
品牌 | 研生 |
公司產品僅供科研實驗產品屬性:
產品名稱:Dicer酶1(DICER1)重組蛋白
物種:Homo sapiens (Human,,人)
英文名稱:Recombinant Dicer 1, Ribonuclease Type III (DICER1)
Dicer; HERNA; Dicer 1,Double-Stranded RNA-Specific Endoribonuclease; Helicase with RNase motif; Helicase MOI
酶與激酶
物種:Homo sapiens (Human,,人) 來源:原核表達 宿主E.coli 內毒素水平:<1.0EU/μg(LAL法測定) 亞細胞定位::細胞質 預測分子量:35.8kDa 實際分子量:33kDa(差異分析請參閱說明書) 片段與標簽:Leu6~Ser290 with N-terminal His Tag 緩沖液成份:100mM NaHCO3, 500mM NaCl緩沖液(pH8.3,含有1mM EDTA, 1mM DTT, 0.01% SKL, 5% Trehalose和Proclin300) 性狀:凍干粉 純度:> 90% 等電點:5.2 應用:Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB. 規(guī)格10μg50μg200μg1mg5mg |
特點:
標記:標記反應簡單、溫和且很少抑制抗體活性,,將與抗體共價結合是一種非常簡便,、直接的標記方法。
酶標記:酶標記抗體是將酶與特異性抗體經適當方法連接而成,,其應用范圍非常廣泛,,結果即時可見、敏感性高,。
熒光標記:熒光基團AbFluorTM是新型的熒光標記物之一,,產品覆蓋350-770nm。不同的AbFluor基團經恰當的激光可發(fā)光,, 從而得知抗體的定位和待測抗原的分布情況,,主要用于細胞分選或高分辨率免疫染色,是一種非常好的亞細胞水平定位的方法,。
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標簽選擇:
親和標簽:蛋白重組表達過程中采用親和標簽融合表達有兩方面的作用:一方面是為了使蛋白純化過程變得更加容易,;另一方面是為了促進某些不溶性蛋白可溶。蛋白標簽可分兩類:一類是短肽類標簽,;一類是長肽以融合蛋白(fused partner)形式共表達,。使用不同的蛋白標簽需要根據具體案例來分析。
不同的系統(tǒng)步驟稍微有些不同的,,大致步驟如下:
真核表達系統(tǒng)的重組蛋白表達步驟:
a. 選擇表達載體和宿主細胞(常用的CHO和HEK293)
b. 表達載體的構建
c. 無內毒素的質粒抽提
d. 細胞瞬時轉染
e. 表達小試,,條件優(yōu)化
f. 表達分析和鑒定(SDS-PGAE和WB)
g. 大量表達
h. 親和純化
i. 檢測和鑒定
原核表達系統(tǒng)的重組蛋白表達步驟:
a. 選擇表達載體
b. 密碼子優(yōu)化
c. 基因合成/亞克隆
d. 轉化表達菌株
e. 蛋白表達小試分析
f. 如果蛋白可溶,蛋白親和純化
g. 如果蛋白不可溶,,則需要變復性來制備可溶蛋白,。
h. 鑒定,包括SDS-PAGE和WB鑒定
GZMH蛋白,;表達蛋白的分析,、純化、檢測
誘導表達成功后,,表達蛋白的分析,、純化、檢測應該順當,,按一般的實驗步驟做沒太大的問題,。
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操作步驟 :
根據使用量,取每 1mL RIPA 加入 10uL PMSF,使 PMSF 的zui終濃度為 1mM,?;靹騻溆茫≒MSF 現用現加)。
1,、樣品前處理:
a)對于貼壁細胞:去除培養(yǎng)液,,用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍,。按照 6 孔板每孔細胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液,。用槍吹打數下,使裂解液和細胞充分接觸,。
b)對于懸浮細胞:離心收集細胞,,用手指把細胞用力彈散。按照6孔板每孔細胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液,,再用手指輕彈以充分裂解細胞,。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多,,必需分裝成 50-100 萬細胞/管,,然后再裂解。
c)對于組織樣品: 把切成細小的碎片,。按照每 20mg 組織加入 150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液,。(如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,,可以適當減少裂解液的用量),。用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解,。
2,、后處理:
將裂解后的樣品 10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,,即可進行后續(xù)的蛋白濃度測定,、SDS-PAGE、Western blotting 和免疫沉淀等操作
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