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當前位置:上海研生實業(yè)有限公司>>天然蛋白、重組蛋白>>重組蛋白/RP>> 銜接因子關(guān)聯(lián)蛋白激酶1(AAK1)重組蛋白
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所 在 地上海市
更新時間:2023-03-22 20:18:35瀏覽次數(shù):336次
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主要用途 | 僅供科研研究實驗 | 英文名稱 | Recombinant Adaptor Associated Protein Kinase 1 (A |
物種 | Homo sapiens (Human,,人) | 規(guī)格 | 10μg50μg200μg1mg5mg |
品牌 | 研生 |
公司產(chǎn)品僅供科研實驗產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱:銜接因子關(guān)聯(lián)蛋白激酶1(AAK1)重組蛋白
物種:Homo sapiens (Human,人)
英文名稱:Recombinant Adaptor Associated Protein Kinase 1 (AAK1)
AP2-Associated Protein Kinase 1
酶與激酶
物種:Homo sapiens (Human,,人) 來源:原核表達 宿主E.coli 內(nèi)毒素水平:<1.0EU/μg(LAL法測定) 亞細胞定位::細胞膜 預(yù)測分子量:30.5kDa 實際分子量:31kDa(差異分析請參閱說明書) 片段與標簽:Met1~Ala243 with N-terminal His Tag 緩沖液成份:PBS, pH7.4, containing 0.01% SKL, 5% Trehalose. 性狀:凍干粉 純度:> 90% 等電點:7.7 應(yīng)用:Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB. 規(guī)格10μg50μg200μg1mg5mg |
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標簽選擇:
親和標簽:蛋白重組表達過程中采用親和標簽融合表達有兩方面的作用:一方面是為了使蛋白純化過程變得更加容易;另一方面是為了促進某些不溶性蛋白可溶,。蛋白標簽可分兩類:一類是短肽類標簽,;一類是長肽以融合蛋白(fused partner)形式共表達。使用不同的蛋白標簽需要根據(jù)具體案例來分析,。
不同的系統(tǒng)步驟稍微有些不同的,,大致步驟如下:
真核表達系統(tǒng)的重組蛋白表達步驟:
a. 選擇表達載體和宿主細胞(常用的CHO和HEK293)
b. 表達載體的構(gòu)建
c. 無內(nèi)毒素的質(zhì)粒抽提
d. 細胞瞬時轉(zhuǎn)染
e. 表達小試,條件優(yōu)化
f. 表達分析和鑒定(SDS-PGAE和WB)
g. 大量表達
h. 親和純化
i. 檢測和鑒定
原核表達系統(tǒng)的重組蛋白表達步驟:
a. 選擇表達載體
b. 密碼子優(yōu)化
c. 基因合成/亞克隆
d. 轉(zhuǎn)化表達菌株
e. 蛋白表達小試分析
f. 如果蛋白可溶,,蛋白親和純化
g. 如果蛋白不可溶,,則需要變復(fù)性來制備可溶蛋白。
h. 鑒定,,包括SDS-PAGE和WB鑒定
GZMH蛋白,;表達蛋白的分析、純化,、檢測
誘導(dǎo)表達成功后,,表達蛋白的分析,、純化、檢測應(yīng)該順當,,按一般的實驗步驟做沒太大的問題,。
操作步驟 :
根據(jù)使用量,取每 1mL RIPA 加入 10uL PMSF,,使 PMSF 的zui終濃度為 1mM,。混勻備用(PMSF 現(xiàn)用現(xiàn)加),。
1,、樣品前處理:
a)對于貼壁細胞:去除培養(yǎng)液,用 PBS,、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍,。按照 6 孔板每孔細胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下,,使裂解液和細胞充分接觸,。
b)對于懸浮細胞:離心收集細胞,用手指把細胞用力彈散,。按照6孔板每孔細胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液,再用手指輕彈以充分裂解細胞,。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細胞沉淀,。如果細胞量較多,必需分裝成 50-100 萬細胞/管,,然后再裂解,。
c)對于組織樣品: 把切成細小的碎片。按照每 20mg 組織加入 150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液,。(如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液,,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當減少裂解液的用量),。用玻璃勻漿器勻漿,,直至充分裂解。
2,、后處理:
將裂解后的樣品 10000-14000g 離心 3-5 分鐘,,取上清,即可進行后續(xù)的蛋白濃度測定,、SDS-PAGE,、Western blotting 和免疫沉淀等操作
特點:
標記:標記反應(yīng)簡單、溫和且很少抑制抗體活性,,將與抗體共價結(jié)合是一種非常簡便,、直接的標記方法,。
酶標記:酶標記抗體是將酶與特異性抗體經(jīng)適當方法連接而成,其應(yīng)用范圍非常廣泛,,結(jié)果即時可見,、敏感性高。
熒光標記:熒光基團AbFluorTM是新型的熒光標記物之一,,產(chǎn)品覆蓋350-770nm,。不同的AbFluor基團經(jīng)恰當?shù)募す饪砂l(fā)光, 從而得知抗體的定位和待測抗原的分布情況,,主要用于細胞分選或高分辨率免疫染色,,是一種非常好的亞細胞水平定位的方法。
EDAR產(chǎn)品名稱: 腫壞死因子受體超家族成員EDAR抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Dog, Rabbit
FLJ20530/C8orf52產(chǎn)品名稱: 8號染色體開放閱讀框52抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Horse, Rabbit, Sheep
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EAF2產(chǎn)品名稱: 睪酮調(diào)節(jié)細胞凋亡誘導(dǎo)和腫基因抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Cow, Horse, Rabbit
CT45A3產(chǎn)品名稱: 腫/睪丸抗原45A3抗體交叉反應(yīng): Human
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Calreticulin產(chǎn)品名稱: 鈣網(wǎng)蛋白抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Chicken, Pig, Cow, Horse, Sheep
銜接因子關(guān)聯(lián)蛋白激酶1(AAK1)重組蛋白人NAD合成mei1(NADSYN1)ELISA試劑盒NADSYN1NAD合成mei1ELISA試劑盒Human NAD Synthetase 1(NADSYN1)ELISA Kit
人NADP依賴性蘋果mei2(ME2)ELISA試劑盒ME2NADP依賴性蘋果mei2elisamei聯(lián)免疫試劑盒Human Malic Enzyme 2, NADP+ Dependent, Mitochondrial(ME2)ELISA Kit
人NADH脫氫mei6(ND6)ELISA試劑盒ND6NADH脫氫mei6elisa檢測試劑盒Human NADH Dehydrogenase 6(ND6)ELISA Kit
人NADH脫氫mei5(ND5)ELISA試劑盒ND5NADH脫氫mei5elisa kitHuman NADH Dehydrogenase 5(ND5)ELISA Kit
人NADH脫氫mei4(ND4)ELISA試劑盒ND4NADH脫氫mei4ELISA試劑盒Human NADH Dehydrogenase 4(ND4)ELISA Kit
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