蛋白表達及純化：

1.培養(yǎng)500ml哺乳動物細胞，然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細胞中，通過瞬時表達產(chǎn)生目標蛋白。

2.收集含有目標蛋白的部分（細胞或培養(yǎng)上清）,。

3.通過親和，離子交換,，疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白,。

4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量。

5.通過Western-blot驗證目標蛋白正確性,。
公司產(chǎn)品僅供科研使用,，不得用于臨床！

商品介紹：

相關產(chǎn)品：

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操作步驟：

Ⅰ 實體組織蛋白的提取

1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑， 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF,，混勻,。冰上保存數(shù)分鐘待用。

2．  每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中,，剪碎成3mm×3mm左右的小塊,，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃勻漿器上下手動勻漿15次,，注意低溫操作,；

3． 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預冷的離心管，離心10000轉(zhuǎn)/分,，4℃離心5 min；

4． 取上清轉(zhuǎn)移至新的預冷的離心管中,，即為全蛋白提取物,，蛋白定量（Bradford法、BCA法）,；

5． 分裝保存于-70℃,避免反復凍融,。

Ⅱ 培養(yǎng)細胞蛋白提取

1． 貼壁培養(yǎng)的細胞，吸去培養(yǎng)基后,，加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次,，每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液,；

2． 懸浮培養(yǎng)的細胞或用細胞刮子刮下的貼壁細胞，將細胞及培養(yǎng)液移至離心管中,， 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min,，再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS，1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次,；

3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑,， 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF，混勻,。冰上保存數(shù)分鐘待用,。

4． 細胞洗滌后，轉(zhuǎn)至新的預冷的離心管中,，加入上述配制好的冷Lysis Buffer,，加入量如下表所示：

5．置于4℃搖床平臺上，溫和振蕩15 min,；

6． 14,000rpm,，4℃離心15min，取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法,、BCA法）,；

7． 分裝保存于-70℃,避免反復凍融。

注意事項：

1,、不同細胞或組織樣品所需的固定時間有所不同,，應當根據(jù)細胞或組織的種類以及組織塊的大小來調(diào)整固定時間。

2,、雖然作用溫和,，但能硬化組織，固定時間過久會導致組織變脆,，切片時易碎,。因此固定時間通常不宜超過 24 小時。

3,、醛基與抗原蛋白的氨基交聯(lián)形成羧甲基,，使抗原決定簇的三維構(gòu)象出現(xiàn)空間障礙。分子間交聯(lián)形成的網(wǎng)格結(jié)構(gòu)可能部分或 掩蓋某些抗原決定簇,，使之不能充分暴露,，可造成假陰性的染色，影響免疫組化結(jié)果,。因此,，4%固定的細胞或組織樣品在進行免疫組化檢測時，有時需要對抗原先進行修復，然后才能進行免疫染色等后續(xù)操作,。

4,、本產(chǎn)品對人體有害，操作時請小心,，并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi),。

5、為了您的安全和健康,，請穿實驗服并戴一次性手套操作 
Phospho-CDK1 (Thr14)產(chǎn)品名稱: 周期su依賴激mei2抗體交叉反應: Human, Mouse, Rat, Rabbit

GDF9產(chǎn)品名稱: 生長分化因子9抗體交叉反應: Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Pig, Cow, Rabbit, Sheep

MATR3產(chǎn)品名稱: 核基質(zhì)蛋白3抗體交叉反應: Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Pig, Cow, Horse, Rabbit

DISC1 (CT)產(chǎn)品名稱: DISC1 C端抗體交叉反應: Human

Aspartate beta hydroxylase產(chǎn)品名稱: 天門冬氨suanβ羥化mei抗體交叉反應: Human, Mouse, Rat, Chicken, Cow, Horse, Rabbit

PEX11B產(chǎn)品名稱: 過氧化物mei體生物合成因子11B抗體交叉反應: Human, Mouse, Rat, Dog, Cow, Horse, Rabbit, Sheep

BLCAP產(chǎn)品名稱: 膀胱相關蛋白BLCAP抗體交叉反應: Human, Mouse, Rat, Pig, Cow, Horse, Rabbit, Sheep

LYSMD4產(chǎn)品名稱: LYSMD4蛋白抗體交叉反應: Human, Mouse, Rat

PEPT1產(chǎn)品名稱: 腸道肽轉(zhuǎn)運蛋白1/小肽轉(zhuǎn)運蛋白1抗體交叉反應: Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Pig, Cow

BBS12產(chǎn)品名稱: 巴爾得-別德爾綜合征相關蛋白12抗體交叉反應: Human, Mouse, Cow, Horse, Rabbit   

多聚ADP核糖甘油水解酶(PARG)重組蛋白人Cytospin人B蛋白(CYTSB)ELISA試劑盒CYTSBCytospinB蛋白ELISA試劑盒Human Cytospin B(CYTSB)ELISA Kit

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