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所 在 地上海市
更新時(shí)間:2023-03-22 14:41:08瀏覽次數(shù):243次
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主要用途 | 僅供科研研究實(shí)驗(yàn) | 英文名稱(chēng) | Recombinant Lysophospholipase I (LYPLA1) |
物種 | Homo sapiens (Human,,人) | 規(guī)格 | 10μg50μg200μg1mg5mg |
品牌 | 研生 |
公司產(chǎn)品僅供科研實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱(chēng):溶血磷脂酶Ⅰ(LYPLA1)重組蛋白
物種:Homo sapiens (Human,人)
英文名稱(chēng):Recombinant Lysophospholipase I (LYPLA1)
APT1; LPL1; LYSOPLA; Acyl-Protein Thioesterase 1
酶與激酶
物種:Homo sapiens (Human,人) 來(lái)源:原核表達(dá) 宿主E.coli 內(nèi)毒素水平:<1.0EU/μg(LAL法測(cè)定) 亞細(xì)胞定位::細(xì)胞質(zhì) 預(yù)測(cè)分子量:28.4kDa 實(shí)際分子量:28kDa(差異分析請(qǐng)參閱說(shuō)明書(shū)) 片段與標(biāo)簽:Met1~Asp230 with N-terminal His Tag 緩沖液成份:PBS, pH7.4, containing 0.01% SKL, 5% Trehalose. 性狀:凍干粉 純度:> 97% 等電點(diǎn):6.3 應(yīng)用:Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB. 規(guī)格10μg50μg200μg1mg5mg |
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標(biāo)簽選擇:
親和標(biāo)簽:蛋白重組表達(dá)過(guò)程中采用親和標(biāo)簽融合表達(dá)有兩方面的作用:一方面是為了使蛋白純化過(guò)程變得更加容易;另一方面是為了促進(jìn)某些不溶性蛋白可溶,。蛋白標(biāo)簽可分兩類(lèi):一類(lèi)是短肽類(lèi)標(biāo)簽,;一類(lèi)是長(zhǎng)肽以融合蛋白(fused partner)形式共表達(dá)。使用不同的蛋白標(biāo)簽需要根據(jù)具體案例來(lái)分析,。
不同的系統(tǒng)步驟稍微有些不同的,大致步驟如下:
真核表達(dá)系統(tǒng)的重組蛋白表達(dá)步驟:
a. 選擇表達(dá)載體和宿主細(xì)胞(常用的CHO和HEK293)
b. 表達(dá)載體的構(gòu)建
c. 無(wú)內(nèi)毒素的質(zhì)粒抽提
d. 細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染
e. 表達(dá)小試,條件優(yōu)化
f. 表達(dá)分析和鑒定(SDS-PGAE和WB)
g. 大量表達(dá)
h. 親和純化
i. 檢測(cè)和鑒定
原核表達(dá)系統(tǒng)的重組蛋白表達(dá)步驟:
a. 選擇表達(dá)載體
b. 密碼子優(yōu)化
c. 基因合成/亞克隆
d. 轉(zhuǎn)化表達(dá)菌株
e. 蛋白表達(dá)小試分析
f. 如果蛋白可溶,,蛋白親和純化
g. 如果蛋白不可溶,則需要變復(fù)性來(lái)制備可溶蛋白,。
h. 鑒定,包括SDS-PAGE和WB鑒定
GZMH蛋白;表達(dá)蛋白的分析、純化、檢測(cè)
誘導(dǎo)表達(dá)成功后,表達(dá)蛋白的分析、純化,、檢測(cè)應(yīng)該順當(dāng),,按一般的實(shí)驗(yàn)步驟做沒(méi)太大的問(wèn)題。
操作步驟 :
根據(jù)使用量,,取每 1mL RIPA 加入 10uL PMSF,,使 PMSF 的zui終濃度為 1mM?;靹騻溆茫≒MSF 現(xiàn)用現(xiàn)加),。
1、樣品前處理:
a)對(duì)于貼壁細(xì)胞:去除培養(yǎng)液,用 PBS,、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液洗一遍,。按照 6 孔板每孔細(xì)胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下,使裂解液和細(xì)胞充分接觸,。
b)對(duì)于懸浮細(xì)胞:離心收集細(xì)胞,用手指把細(xì)胞用力彈散,。按照6孔板每孔細(xì)胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液,,再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒(méi)有明顯的細(xì)胞沉淀,。如果細(xì)胞量較多,必需分裝成 50-100 萬(wàn)細(xì)胞/管,,然后再裂解,。
c)對(duì)于組織樣品: 把切成細(xì)小的碎片。按照每 20mg 組織加入 150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液,。(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液,,如果需要高濃度的蛋白樣品,,可以適當(dāng)減少裂解液的用量)。用玻璃勻漿器勻漿,,直至充分裂解。
2、后處理:
將裂解后的樣品 10000-14000g 離心 3-5 分鐘,,取上清,,即可進(jìn)行后續(xù)的蛋白濃度測(cè)定、SDS-PAGE,、Western blotting 和免疫沉淀等操作
特點(diǎn):
標(biāo)記:標(biāo)記反應(yīng)簡(jiǎn)單,、溫和且很少抑制抗體活性,將與抗體共價(jià)結(jié)合是一種非常簡(jiǎn)便、直接的標(biāo)記方法,。
酶標(biāo)記:酶標(biāo)記抗體是將酶與特異性抗體經(jīng)適當(dāng)方法連接而成,,其應(yīng)用范圍非常廣泛,,結(jié)果即時(shí)可見(jiàn),、敏感性高,。
熒光標(biāo)記:熒光基團(tuán)AbFluorTM是新型的熒光標(biāo)記物之一,,產(chǎn)品覆蓋350-770nm,。不同的AbFluor基團(tuán)經(jīng)恰當(dāng)?shù)募す饪砂l(fā)光, 從而得知抗體的定位和待測(cè)抗原的分布情況,,主要用于細(xì)胞分選或高分辨率免疫染色,是一種非常好的亞細(xì)胞水平定位的方法。
FPR3產(chǎn)品名稱(chēng): N-甲酰肽受體3抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat
PARP1產(chǎn)品名稱(chēng): 多苷二磷suan多聚mei抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat
Oncostatin M產(chǎn)品名稱(chēng): 基因蛋白抑suM抗體交叉反應(yīng): Human
應(yīng)用類(lèi)型: Other英文名稱(chēng): TIA1標(biāo)記: Unconjugated
human CD34/Cy7產(chǎn)品名稱(chēng): Cy7標(biāo)記小鼠抗人CD34單克隆抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Pig, Cow, Horse, Rabbit, Goose, Zebrafish, Sheep, GPV, Firefly, Bee, Belt Jellyfish, Fish, GuineaPig, Hamster, Shrimp, Fruit Fly, Goat, Monkey, Cat, Donkey, Duck, Chimpanzee, Arabidopsis Thalian
DCUN1D4產(chǎn)品名稱(chēng): DCN1樣蛋白4抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Horse, Sheep
NRXN2產(chǎn)品名稱(chēng): 軸突蛋白2抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Horse, Sheep
ACTH (7-23)產(chǎn)品名稱(chēng): 促腎上皮質(zhì)激suACTH (7-23)抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Rabbit, GuineaPig
Phospho-NMDAR1 (Ser896)產(chǎn)品名稱(chēng): 離子型谷氨suan受體1抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Cow
phospho-PIK3R1 (Tyr467)產(chǎn)品名稱(chēng): 磷脂酰肌醇激mei抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Horse, Rabbit
溶血磷脂酶Ⅰ(LYPLA1)重組蛋白人蛋白酪氨suan磷suanmeiⅣA3(PTPⅣA3)ELISA試劑盒PTPⅣA3蛋白酪氨suan磷suanmeiⅣA3ELISA試劑盒Human Protein Tyrosine Phosphatase Type IVA 3(PTP4A3)ELISA Kit
人蛋白酪氨suan激mei2β(PTK2β)ELISA試劑盒PTK2β蛋白酪氨suan激mei2βelisamei聯(lián)免疫試劑盒Human Protein Tyrosine Kinase 2 Beta(PTK2b)ELISA Kit
人蛋白聚糖3(PRG3)ELISA試劑盒PRG3蛋白聚糖3elisa檢測(cè)試劑盒Human Proteoglycan 3(PRG3)ELISA Kit
人蛋白激meiα(PKIα)ELISA試劑盒PKIα蛋白激meiαelisa kitHuman Protein Kinase Inhibitor Alpha(PKIa)ELISA Kit
人蛋白激meiR(PKR)ELISA試劑盒PKR蛋白激meiRELISA試劑盒Human Protein Kinase R(PKR)ELISA Kit
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