蛋白表達(dá)及純化：

1.培養(yǎng)500ml哺乳動物細(xì)胞,，然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中,，通過瞬時表達(dá)產(chǎn)生目標(biāo)蛋白,。

2.收集含有目標(biāo)蛋白的部分（細(xì)胞或培養(yǎng)上清）,。

3.通過親和,，離子交換，疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達(dá)的重組蛋白,。

4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量,。

5.通過Western-blot驗證目標(biāo)蛋白正確性。
公司產(chǎn)品僅供科研使用,，不得用于臨床,！

商品介紹：

相關(guān)產(chǎn)品：

脂肪酶H(LIPH)重組蛋白Recombinant Cathepsin K (CTSK)

脂蛋白脂酶(LPL)重組蛋白Recombinant Phospholipase C Gamma 1 (PLCg1)

脂蛋白關(guān)聯(lián)磷脂酶A2(LpPLA2)重組蛋白Recombinant Lactoperoxidase (LPO)

脂蛋白關(guān)聯(lián)磷脂酶A2(LpPLA2)真核蛋白Recombinant Ribonuclease A (RNase A)   

操作步驟：

Ⅰ 實體組織蛋白的提取

1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑， 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF,，混勻,。冰上保存數(shù)分鐘待用,。

2．  每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中，剪碎成3mm×3mm左右的小塊,，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer,，玻璃勻漿器上下手動勻漿15次，注意低溫操作,；

3． 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預(yù)冷的離心管,，離心10000轉(zhuǎn)/分，4℃離心5 min,；

4． 取上清轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中,，即為全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法,、BCA法）,；

5． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。

Ⅱ 培養(yǎng)細(xì)胞蛋白提取

1． 貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞,，吸去培養(yǎng)基后,，加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次，每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液,；

2． 懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞或用細(xì)胞刮子刮下的貼壁細(xì)胞,，將細(xì)胞及培養(yǎng)液移至離心管中， 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min,，再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS,，1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次；

3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑,， 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF,，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用,。

4． 細(xì)胞洗滌后,，轉(zhuǎn)至新的預(yù)冷的離心管中，加入上述配制好的冷Lysis Buffer,，加入量如下表所示：

5．置于4℃搖床平臺上,，溫和振蕩15 min；

6． 14,000rpm,，4℃離心15min,，取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法、BCA法）,；

7． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融,。

注意事項：

1、不同細(xì)胞或組織樣品所需的固定時間有所不同,，應(yīng)當(dāng)根據(jù)細(xì)胞或組織的種類以及組織塊的大小來調(diào)整固定時間,。

2,、雖然作用溫和，但能硬化組織,，固定時間過久會導(dǎo)致組織變脆,，切片時易碎。因此固定時間通常不宜超過 24 小時,。

3,、醛基與抗原蛋白的氨基交聯(lián)形成羧甲基，使抗原決定簇的三維構(gòu)象出現(xiàn)空間障礙,。分子間交聯(lián)形成的網(wǎng)格結(jié)構(gòu)可能部分或 掩蓋某些抗原決定簇,，使之不能充分暴露，可造成假陰性的染色,，影響免疫組化結(jié)果,。因此，4%固定的細(xì)胞或組織樣品在進行免疫組化檢測時,，有時需要對抗原先進行修復(fù),，然后才能進行免疫染色等后續(xù)操作。

4,、本產(chǎn)品對人體有害,，操作時請小心，并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi),。

5,、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作 
NUDT17產(chǎn)品名稱: NUDT17蛋白抗體交叉反應(yīng): Mouse

C9orf16產(chǎn)品名稱: 9號染色體開放閱讀框16抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Horse, Sheep

FAM18B產(chǎn)品名稱: FAM18B蛋白抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Rabbit, Zebrafish, Sheep

Beclin 1產(chǎn)品名稱: 自噬效應(yīng)蛋白Beclin 1抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat

NUDT21產(chǎn)品名稱: 剪切和多聚苷suan化特異性因子5抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Horse, Rabbit, Sheep

HBeAg產(chǎn)品名稱: 人乙型e抗原單克?。ò唬┛贵w標(biāo)記: Unconjugated

eI4EBP2產(chǎn)品名稱: eIF4E結(jié)合蛋白2抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Cow

Retinal S antigen產(chǎn)品名稱: 視網(wǎng)膜S抗原抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Dog, Cow, Rabbit, Sheep

LH(coating)產(chǎn)品名稱: 人促黃體生成su單克隆抗體(包被)交叉反應(yīng): Human

beta lactamase TEM產(chǎn)品名稱: β內(nèi)酰胺mei抗體交叉反應(yīng): Escherichia Coli   

果糖-1,6-二磷酸酶2(FBP2)重組蛋白人Discs大同源物3(DLG3)ELISA試劑盒DLG3Discs大同源物3ELISA試劑盒Human Discs, Large Homolog 3(DLG3)ELISA Kit

人Dickkopf相關(guān)蛋白2(DKK2)ELISA試劑盒DKK2Dickkopf相關(guān)蛋白2elisamei聯(lián)免疫試劑盒Human Dickkopf Related Protein 2(DKK2)ELISA Kit

人Dicermei1(DICER1)ELISA試劑盒DICER1Dicermei1elisa檢測試劑盒Human Dicer 1, Ribonuclease Type III(DICER1)ELISA Kit

人Diaphanous同源物1(DIAPH1)ELISA試劑盒DIAPH1Diaphanous同源物1elisa kitHuman Diaphanous Homolog 1(DIAPH1)ELISA Kit

人Desmuslin蛋白(DMN)ELISA試劑盒DMNDesmuslin蛋白ELISA試劑盒Human Desmuslin(DMN)ELISA Kit