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供貨周期 | 現貨 | 應用領域 | 化工,生物產業(yè) |
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主要用途 | 僅供科研研究實驗 | 英文名稱 | Recombinant A Disintegrin And Metalloprotease 5 (A |
物種 | Rattus norvegicus (Rat,大鼠) | 規(guī)格 | 10μg50μg200μg1mg5mg |
品牌 | 研生 |
商品介紹:
tMDCII; TMDC2; Putative transmembrane metalloproteinase-like, disintegrin-like, and cysteine-rich protein II; Disintegrin and metalloproteinase domain-containing protein 5 酶與激酶 物種:Rattus norvegicus (Rat,大鼠) 來源:原核表達 宿主E.coli 內毒素水平:<1.0EU/μg(LAL法測定) 亞細胞定位::n/a 預測分子量:28.4kDa 實際分子量:30kDa(差異分析請參閱說明書) 片段與標簽:Cys413~Gln649 (Accession # Q5BK84) with 緩沖液成份:磷酸鹽緩沖液(pH7.4,含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.) 性狀:凍干粉 純度:> 95% 等電點:- 應用:Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB. 規(guī)格10μg50μg200μg1mg5mg |
公司產品僅供科研使用,不得用于臨床,!
產品名稱 | 英文名稱 | 物種 |
解整合素金屬蛋白酶5(ADAM5)重組蛋白 | Recombinant A Disintegrin And Metalloprotease 5 (ADAM5) | Rattus norvegicus (Rat,大鼠) |
蛋白表達及純化:
1.培養(yǎng)500ml哺乳動物細胞,,然后將重組質粒轉染到細胞中,,通過瞬時表達產生目標蛋白。
2.收集含有目標蛋白的部分(細胞或培養(yǎng)上清),。
3.通過親和,,離子交換,疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白,。
4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結果并控制最終產品質量,。
5.通過Western-blot驗證目標蛋白正確性。
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操作步驟:
Ⅰ 實體組織蛋白的提取
1. 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑,, 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF,,混勻。冰上保存數分鐘待用,。
2. 每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中,,剪碎成3mm×3mm左右的小塊,加入0.5~1 mL冷 Lysis Buffer,,玻璃勻漿器上下手動勻漿15次,,注意低溫操作;
3. 取組織勻漿液轉移到1.5mL預冷的離心管,,離心10000轉/分,,4℃離心5 min;
4. 取上清轉移至新的預冷的離心管中,,即為全蛋白提取物,,蛋白定量(Bradford法,、BCA法),;
5. 分裝保存于-70℃,避免反復凍融。
Ⅱ 培養(yǎng)細胞蛋白提取
1. 貼壁培養(yǎng)的細胞,,吸去培養(yǎng)基后,,加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次,每次振搖數次以盡量去除培養(yǎng)液,;
2. 懸浮培養(yǎng)的細胞或用細胞刮子刮下的貼壁細胞,,將細胞及培養(yǎng)液移至離心管中, 1000轉/分離心10 min,再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS,,1000轉/分離心5 min洗兩次,;
3. 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑, 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF,,混勻,。冰上保存數分鐘待用。
4. 細胞洗滌后,,轉至新的預冷的離心管中,,加入上述配制好的冷Lysis Buffer,加入量如下表所示:
細胞數量 | Lysis Buffer加入量 |
107個 | 0.5 mL~1 mL |
5×106個 | 0.2 mL~0.5 mL |
5.置于4℃搖床平臺上,,溫和振蕩15 min,;
6. 14,000rpm,4℃離心15min,,取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量(Bradford法,、BCA法);
7. 分裝保存于-70℃,避免反復凍融,。
Complement C3產品名稱: 過敏毒suC3(補體C3)抗體交叉反應: Human, Mouse, Rat, Pig, Cow, Horse, Rabbit, GuineaPig
phospho-STAT5a (Tyr694)產品名稱: 信號轉導和轉錄激活因子5a抗體交叉反應: Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Pig, Cow, Rabbit, Sheep
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注意事項:
1、不同細胞或組織樣品所需的固定時間有所不同,,應當根據細胞或組織的種類以及組織塊的大小來調整固定時間,。
2、雖然作用溫和,,但能硬化組織,,固定時間過久會導致組織變脆,切片時易碎,。因此固定時間通常不宜超過 24 小時,。
3、醛基與抗原蛋白的氨基交聯(lián)形成羧甲基,,使抗原決定簇的三維構象出現空間障礙,。分子間交聯(lián)形成的網格結構可能部分或 掩蓋某些抗原決定簇,使之不能充分暴露,,可造成假陰性的染色,,影響免疫組化結果。因此,,4%固定的細胞或組織樣品在進行免疫組化檢測時,,有時需要對抗原先進行修復,然后才能進行免疫染色等后續(xù)操作,。
4,、本產品對人體有害,,操作時請小心,并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內,。
5,、為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作
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