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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應用領域 | 化工,生物產業(yè) |
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主要用途 | 僅供科研研究實驗 | 英文名稱 | Recombinant Carnosine Dipeptidase 2 (CNDP2) |
物種 | Homo sapiens (Human,,人) | 規(guī)格 | 10μg50μg200μg1mg5mg |
品牌 | 研生 |
公司產品僅供科研實驗產品屬性:
產品名稱:肌肽酶2(CNDP2)重組蛋白
物種:Homo sapiens (Human,人)
英文名稱:Recombinant Carnosine Dipeptidase 2 (CNDP2)
PEPA; CN2; CPGL; Peptidase A; Cytosolic Nonspecific Dipeptidase; Metallopeptidase M20 Family; Glutamate carboxypeptidase-like protein 1
酶與激酶
物種:Homo sapiens (Human,人) 來源:原核表達 宿主E.coli 內毒素水平:<1.0EU/μg(LAL法測定) 亞細胞定位::分泌 預測分子量:26.9kDa 實際分子量:27kDa(差異分析請參閱說明書) 片段與標簽:Val269~Asp475 with N-terminal His Tag 緩沖液成份:磷酸鹽緩沖液(pH7.4,,含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.) 性狀:凍干粉 純度:> 90% 等電點:6.5 應用:Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB. 規(guī)格10μg50μg200μg1mg5mg |
特點:
標記:標記反應簡單,、溫和且很少抑制抗體活性,將與抗體共價結合是一種非常簡便,、直接的標記方法,。
酶標記:酶標記抗體是將酶與特異性抗體經適當方法連接而成,其應用范圍非常廣泛,,結果即時可見,、敏感性高。
熒光標記:熒光基團AbFluorTM是新型的熒光標記物之一,,產品覆蓋350-770nm,。不同的AbFluor基團經恰當的激光可發(fā)光, 從而得知抗體的定位和待測抗原的分布情況,,主要用于細胞分選或高分辨率免疫染色,,是一種非常好的亞細胞水平定位的方法。
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標簽選擇:
親和標簽:蛋白重組表達過程中采用親和標簽融合表達有兩方面的作用:一方面是為了使蛋白純化過程變得更加容易,;另一方面是為了促進某些不溶性蛋白可溶。蛋白標簽可分兩類:一類是短肽類標簽,;一類是長肽以融合蛋白(fused partner)形式共表達,。使用不同的蛋白標簽需要根據具體案例來分析。
不同的系統(tǒng)步驟稍微有些不同的,,大致步驟如下:
真核表達系統(tǒng)的重組蛋白表達步驟:
a. 選擇表達載體和宿主細胞(常用的CHO和HEK293)
b. 表達載體的構建
c. 無內毒素的質粒抽提
d. 細胞瞬時轉染
e. 表達小試,,條件優(yōu)化
f. 表達分析和鑒定(SDS-PGAE和WB)
g. 大量表達
h. 親和純化
i. 檢測和鑒定
原核表達系統(tǒng)的重組蛋白表達步驟:
a. 選擇表達載體
b. 密碼子優(yōu)化
c. 基因合成/亞克隆
d. 轉化表達菌株
e. 蛋白表達小試分析
f. 如果蛋白可溶,,蛋白親和純化
g. 如果蛋白不可溶,,則需要變復性來制備可溶蛋白。
h. 鑒定,,包括SDS-PAGE和WB鑒定
GZMH蛋白,;表達蛋白的分析、純化,、檢測
誘導表達成功后,,表達蛋白的分析、純化,、檢測應該順當,,按一般的實驗步驟做沒太大的問題。
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C9orf41產品名稱: 9號染色體開放閱讀框41抗體交叉反應: Human, Mouse, Rat, Chicken, Pig, Cow, Rabbit, Sheep
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PHD1產品名稱: 脯氨酰羥化mei抗體交叉反應: Human, Mouse, Rat, Cow, Sheep
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人N-乙酰α-D-氨基葡萄糖苷mei(NAGLU)ELISA試劑盒NAGLUN-乙酰α-D-氨基葡萄糖苷meielisamei聯(lián)免疫試劑盒Human N-Acetyl Alpha-D-Glucosaminidase(NAGLU)ELISA Kit
人N-?;掖及穝uan?;痬ei(NAAA)ELISA試劑盒NAAAN-酰基乙醇胺suan?;痬eielisa檢測試劑盒Human N-Acylethanolamine Acid Amidase(NAAA)ELISA Kit
人N-?;拾贝减0匪鈓ei2(ASAH2)ELISA試劑盒ASAH2N-酰基鞘氨醇酰胺水解mei2elisa kitHuman N-Acylsphingosine Amidohydrolase 2(ASAH2)ELISA Kit
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操作步驟 :
根據使用量,取每 1mL RIPA 加入 10uL PMSF,,使 PMSF 的zui終濃度為 1mM,。混勻備用(PMSF 現(xiàn)用現(xiàn)加),。
1,、樣品前處理:
a)對于貼壁細胞:去除培養(yǎng)液,用 PBS,、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍,。按照 6 孔板每孔細胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數下,,使裂解液和細胞充分接觸,。
b)對于懸浮細胞:離心收集細胞,用手指把細胞用力彈散,。按照6孔板每孔細胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液,,再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀,。如果細胞量較多,,必需分裝成 50-100 萬細胞/管,然后再裂解,。
c)對于組織樣品: 把切成細小的碎片,。按照每 20mg 組織加入 150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液,,如果需要高濃度的蛋白樣品,,可以適當減少裂解液的用量)。用玻璃勻漿器勻漿,,直至充分裂解,。
2、后處理:
將裂解后的樣品 10000-14000g 離心 3-5 分鐘,,取上清,,即可進行后續(xù)的蛋白濃度測定、SDS-PAGE、Western blotting 和免疫沉淀等操作
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