蛋白表達(dá)及純化：

1.培養(yǎng)500ml哺乳動物細(xì)胞,，然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中，通過瞬時表達(dá)產(chǎn)生目標(biāo)蛋白,。

2.收集含有目標(biāo)蛋白的部分（細(xì)胞或培養(yǎng)上清）,。

3.通過親和，離子交換,，疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達(dá)的重組蛋白,。

4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量。

5.通過Western-blot驗(yàn)證目標(biāo)蛋白正確性,。
公司產(chǎn)品僅供科研使用,，不得用于臨床！

商品介紹：

相關(guān)產(chǎn)品：

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操作步驟：

Ⅰ 實(shí)體組織蛋白的提取

1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑， 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF,，混勻,。冰上保存數(shù)分鐘待用。

2．  每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中,，剪碎成3mm×3mm左右的小塊,，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃勻漿器上下手動勻漿15次,，注意低溫操作,；

3． 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預(yù)冷的離心管，離心10000轉(zhuǎn)/分,，4℃離心5 min,；

4． 取上清轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中，即為全蛋白提取物,，蛋白定量（Bradford法,、BCA法）；

5． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融,。

Ⅱ 培養(yǎng)細(xì)胞蛋白提取

1． 貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞,，吸去培養(yǎng)基后，加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次,，每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液,；

2． 懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞或用細(xì)胞刮子刮下的貼壁細(xì)胞,，將細(xì)胞及培養(yǎng)液移至離心管中， 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min,，再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS,，1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次；

3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑,， 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF,，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用,。

4． 細(xì)胞洗滌后,，轉(zhuǎn)至新的預(yù)冷的離心管中，加入上述配制好的冷Lysis Buffer,，加入量如下表所示：

5．置于4℃搖床平臺上,，溫和振蕩15 min；

6． 14,000rpm,，4℃離心15min,，取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法、BCA法）,；

7． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融,。

注意事項(xiàng)：

1、不同細(xì)胞或組織樣品所需的固定時間有所不同,，應(yīng)當(dāng)根據(jù)細(xì)胞或組織的種類以及組織塊的大小來調(diào)整固定時間,。

2、雖然作用溫和,，但能硬化組織,，固定時間過久會導(dǎo)致組織變脆，切片時易碎,。因此固定時間通常不宜超過 24 小時,。

3、醛基與抗原蛋白的氨基交聯(lián)形成羧甲基,，使抗原決定簇的三維構(gòu)象出現(xiàn)空間障礙,。分子間交聯(lián)形成的網(wǎng)格結(jié)構(gòu)可能部分或 掩蓋某些抗原決定簇，使之不能充分暴露,，可造成假陰性的染色,，影響免疫組化結(jié)果,。因此,，4%固定的細(xì)胞或組織樣品在進(jìn)行免疫組化檢測時，有時需要對抗原先進(jìn)行修復(fù),，然后才能進(jìn)行免疫染色等后續(xù)操作,。

4,、本產(chǎn)品對人體有害，操作時請小心,，并注意有效防護(hù)以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi),。

5、為了您的安全和健康,，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作 
BPOZ產(chǎn)品名稱: 伸長因子結(jié)合蛋白抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Horse

CART產(chǎn)品名稱: 卡因和安調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄蛋白抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Pig, Cow, Sheep

Paralemmin 1產(chǎn)品名稱: 細(xì)胞膜調(diào)控蛋白Paralemmin 1抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Sheep

KRG2/DDX11產(chǎn)品名稱: 角質(zhì)細(xì)胞生長因子調(diào)節(jié)蛋白2抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat

DYRK1A產(chǎn)品名稱: 絲氨suan/蘇氨suan蛋白激meiMNB抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Pig, Cow, Horse, Rabbit, Sheep

phospho-CHEK1 (Ser286)產(chǎn)品名稱: 細(xì)胞周期檢測點(diǎn)激mei1抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Chicken, Dog, Horse

BRD2產(chǎn)品名稱: BRD2蛋白抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat

LRRC25產(chǎn)品名稱: 富含亮氨suan重復(fù)蛋白25抗體交叉反應(yīng): Human

phospho-LKB1 (Ser334)產(chǎn)品名稱: 絲氨suan/蘇氨suan蛋白激mei抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat

CNTROB產(chǎn)品名稱: 乳易感基因2相互作用蛋白抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Cow, Horse, Rabbit   

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