產(chǎn)品名稱：SV40T和EBNA1基因修飾細胞;;293ET

規(guī)格：1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶
貨號：YS-02X9819

細胞生長實驗 ：細胞生長良好,，形態(tài)正常

儲存條件：2℃-8℃,，避光儲存

運輸條件：冰袋冷藏運輸
公司產(chǎn)品僅用于科研

細胞培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1） 準備RPMI-1640 培養(yǎng)基,；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%,；Glutamax（invitrogen 35050061）,，1%；Sodium pyruvate（invitrogen 11360070）,，1%,；雙抗，1%,。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%,；二氧化碳，5%,。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清,，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細胞處理：

1） 復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?50px皿中，加入約8ml培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并檢查細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng),。

注意事項：

（1）凍存前細胞狀態(tài)，細胞最好在對數(shù)生長期,，細胞密度適合,，剛剛發(fā)生細胞融合，過密或連成片的細胞狀態(tài)不好,，而且消化時不容易分散,；

（2）凍存的密度不宜過低，10的6次方-7次方的數(shù)量級比較好,，我凍存的細胞一般T25培養(yǎng)瓶（5*107）,，一瓶凍一管（1.5ml凍存管），10cm培養(yǎng)皿（大概10的8次方個細胞）分成兩管,。

（3）消化和吹打,，切忌胰酶消化過度，吹打不可太用力,，最好不要吹出好多泡泡,。消化后立即加入*培養(yǎng)基吹打哦，不是加入凍存液再吹打,。

（4）離心后加入凍存液,。凍存液中FBS的用量對于腫瘤細胞株而言要求不是很嚴格，我從10%-90%都用過,，問題不大,，個人認為10%-20%可以了,，能節(jié)約處就節(jié)約點嘛！另外,，凍存液可以在處理細胞前配置,，放在4度冰箱預(yù)冷。細胞離心后直接用預(yù)冷的凍存液重懸,，移入凍存管,。

（5）關(guān)于“慢凍"，傳統(tǒng)的方法,，LLC細胞凍存管用棉花包好,，4度2h，-20度2h或更長,，-80度過夜,，最后液氮。對于條件較好的實驗室和細胞凍存數(shù)量多的實驗室,，推薦使用程序降溫盒,，內(nèi)裝異丙醇，在-80度并內(nèi)可以逐漸降溫,，很方便,，省了包棉花、4度,、-20度了,。

使用步驟：

一）準確稱量試劑：根據(jù)不同的菌類和用途，選擇適宜的培養(yǎng)基,，培養(yǎng)基所需試劑必須純凈,。

（二）校正pH值：將稱量好的培養(yǎng)基各種成分放入容器內(nèi)，標記劃線,，加熱溶解,，補充水分，測定酸堿度,，常用pH6.8～8.0的精密試紙或酸度計測定,。用1N NaOH和1N HCl調(diào)節(jié)pH值到適宜范圍內(nèi)。

（三）過濾：將玻璃漏斗置鐵架上,，再用人子宮成纖維細胞*培養(yǎng)基紗布夾棉花或用濾紙放在漏斗中,，將上述培養(yǎng)基倒入其中過濾至透明,。

（四）分裝：將過濾后的培養(yǎng)基分裝于中試管或三角瓶內(nèi)（試管內(nèi)每支裝5mL,；三角瓶中裝100～150ml），塞好棉塞用牛皮紙包扎好,，準備滅菌,。

（五）滅菌：培養(yǎng)基的滅菌,，常用高壓蒸汽滅菌法。一般微生物的營養(yǎng)細胞在水中煮沸后即被殺死,，但細菌的芽胞有較強的抗熱性,，須經(jīng)高壓蒸汽滅菌才能達到*滅菌的目的。根據(jù)蒸汽溫度隨壓力升高而上升的原理,，即壓力越大,，蒸汽溫度就越高。因此,，在同一溫度條件下,，采用高壓蒸汽滅菌比干熱滅菌法效果要好。而且在濕熱情況下,，菌體吸收水分后,，其蛋白質(zhì)易于凝固變性，因為蒸汽的穿透力強,，殺菌效果好,。

細胞特性：

1)】組織來源于實驗動物的正常眼組織。

2)細胞鑒定：細胞免疫熒光染色為陽性,。

3)經(jīng)鑒定細胞純度高于90%,。

4)不含有 HIV-1、 HBV,、HCV,、支原體、細菌,、酵母和真菌,。

5)細胞生長方式：上皮樣，不規(guī)則細胞,，貼壁培養(yǎng),。
SP-A/FITC 熒光素標記肺表面活性蛋白A抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

DDC (DOPA decarboxylase) 多巴胺脫羧酶(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

原活化蛋白激酶p38抗體  P38 MAPK 0.1ml

surface layer protein 英文名稱： 乳酸表面蛋白抗體 0.2ml

ECT2 英文名稱： 上皮細胞癌轉(zhuǎn)化蛋白2抗體 0.1ml

Rhesus antibody Rh phospho-NFKBIA(Ser32/36) 磷酸化IKB alpha(Ser32/36)抗體 規(guī)格 0.1ml

DDC (DOPA decarboxylase) 多巴胺脫羧酶(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

Human PAF (plateletactivating factor) 人血小板活化因子Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

 CK7 細胞角蛋白7抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Nrf2 核因子2相關(guān)因子2抗體 規(guī)格 0.1ml

Prestained Protein Marker 預(yù)染寬范圍蛋白質(zhì)分子量標準(10-170kDa)/10條帶 100ul

THOP1 英文名稱： Thimet內(nèi)肽酶抗體 0.2ml

C8orf58 英文名稱： 8號染色體開放閱讀框58抗體 0.2ml

 CK7 細胞角蛋白7抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Dog IgM/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標記的兔抗犬IgM抗體 0.1ml

FRMD8 英文名稱： FRMD8蛋白抗體 0.2ml

抗乙肝病毒pre S1/乙肝病毒pre S2抗體  HBV/pre S1/S2 protein 0.1ml

 phospho-PKC delta (Tyr311)/FITC 熒光素標記磷酸化蛋白激酶C亞性D型抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-RSK2 (Ser227) 磷酸化核糖體S6激酶RSK2抗體 規(guī)格 0.1ml

Donkey  Guinea IgG 驢抗豚鼠IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 1mg
SV40T和EBNA1基因修飾細胞;;293ETCAPSO. Na；3-(環(huán)己)-2-羥基-1-磺酸鈉鹽紫花前胡素尼羅紅染色試劑盒

CAPSO .Na,；3-(環(huán)己)-2-羥基-1-磺酸鈉鹽紫堇靈脂質(zhì)尼羅紅染色試劑盒

CAPSO,；3-(環(huán)己)-2-羥基-1-磺酸 紫杉石蠟切片脂質(zhì)尼羅紅間接染色試劑盒

SBES；2-溴乙基磺酸鈉紫杉葉素石蠟切片脂質(zhì)尼羅紅直接染色試劑盒

BICINE,；N,N-二羥基甘紫菀酮凍切片脂質(zhì)尼羅紅染色試劑盒

BES sodium salt; N,N-二(2-羥基)-2-氨基乙磺酸鈉紫云英苷尼羅紅（NILE RED）溶液（0.5毫克/毫升）

BES free acid; N,N-(2-羥)-2-氨基乙磺酸棕櫚酸0.1摩爾 （Sodium Dichromate）

黃多糖(68%)總銀杏酸

(C13:0,C15:1,C17:1)電融合基質(zhì)