產(chǎn)品名稱：小鼠胚胎成骨細(xì)胞前體細(xì)胞;MC3T3-E1

規(guī)格：1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶
貨號(hào)：YS-02X9815

細(xì)胞生長實(shí)驗(yàn) ：細(xì)胞生長良好,，形態(tài)正常

儲(chǔ)存條件：2℃-8℃,，避光儲(chǔ)存

運(yùn)輸條件：冰袋冷藏運(yùn)輸
公司產(chǎn)品僅用于科研

細(xì)胞培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備RPMI-1640 培養(yǎng)基,；優(yōu)質(zhì)胎牛血清,，10%,；Glutamax（invitrogen 35050061）,，1%,；Sodium pyruvate（invitrogen 11360070）,，1%；雙抗,，1%,。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%,；二氧化碳,，5%。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配,。

二． 細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入250px皿中,，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

注意事項(xiàng)：

（1）凍存前細(xì)胞狀態(tài),，細(xì)胞最好在對(duì)數(shù)生長期,，細(xì)胞密度適合，剛剛發(fā)生細(xì)胞融合,，過密或連成片的細(xì)胞狀態(tài)不好,，而且消化時(shí)不容易分散；

（2）凍存的密度不宜過低,，10的6次方-7次方的數(shù)量級(jí)比較好,，我凍存的細(xì)胞一般T25培養(yǎng)瓶（5*107），一瓶凍一管（1.5ml凍存管）,，10cm培養(yǎng)皿（大概10的8次方個(gè)細(xì)胞）分成兩管,。

（3）消化和吹打，切忌胰酶消化過度,，吹打不可太用力,，最好不要吹出好多泡泡。消化后立即加入*培養(yǎng)基吹打哦,，不是加入凍存液再吹打,。

（4）離心后加入凍存液。凍存液中FBS的用量對(duì)于腫瘤細(xì)胞株而言要求不是很嚴(yán)格,，我從10%-90%都用過,，問題不大，個(gè)人認(rèn)為10%-20%可以了,，能節(jié)約處就節(jié)約點(diǎn)嘛,！另外，凍存液可以在處理細(xì)胞前配置,，放在4度冰箱預(yù)冷,。細(xì)胞離心后直接用預(yù)冷的凍存液重懸，移入凍存管,。

（5）關(guān)于“慢凍",，傳統(tǒng)的方法，LLC細(xì)胞凍存管用棉花包好,，4度2h,，-20度2h或更長，-80度過夜,，最后液氮,。對(duì)于條件較好的實(shí)驗(yàn)室和細(xì)胞凍存數(shù)量多的實(shí)驗(yàn)室，推薦使用程序降溫盒，內(nèi)裝異丙醇,，在-80度并內(nèi)可以逐漸降溫，很方便,，省了包棉花,、4度、-20度了,。

使用步驟：

一）準(zhǔn)確稱量試劑：根據(jù)不同的菌類和用途,，選擇適宜的培養(yǎng)基，培養(yǎng)基所需試劑必須純凈,。

（二）校正pH值：將稱量好的培養(yǎng)基各種成分放入容器內(nèi),，標(biāo)記劃線，加熱溶解,，補(bǔ)充水分,，測定酸堿度，常用pH6.8～8.0的精密試紙或酸度計(jì)測定,。用1N NaOH和1N HCl調(diào)節(jié)pH值到適宜范圍內(nèi),。

（三）過濾：將玻璃漏斗置鐵架上，再用人子宮成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基紗布夾棉花或用濾紙放在漏斗中,，將上述培養(yǎng)基倒入其中過濾至透明,。

（四）分裝：將過濾后的培養(yǎng)基分裝于中試管或三角瓶內(nèi)（試管內(nèi)每支裝5mL；三角瓶中裝100～150ml）,，塞好棉塞用牛皮紙包扎好,，準(zhǔn)備滅菌。

（五）滅菌：培養(yǎng)基的滅菌,，常用高壓蒸汽滅菌法,。一般微生物的營養(yǎng)細(xì)胞在水中煮沸后即被殺死，但細(xì)菌的芽胞有較強(qiáng)的抗熱性,，須經(jīng)高壓蒸汽滅菌才能達(dá)到*滅菌的目的,。根據(jù)蒸汽溫度隨壓力升高而上升的原理，即壓力越大,，蒸汽溫度就越高,。因此，在同一溫度條件下,，采用高壓蒸汽滅菌比干熱滅菌法效果要好,。而且在濕熱情況下，菌體吸收水分后,，其蛋白質(zhì)易于凝固變性,，因?yàn)檎羝拇┩噶?qiáng)，殺菌效果好。

細(xì)胞特性：

1)】組織來源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的正常眼組織,。

2)細(xì)胞鑒定：細(xì)胞免疫熒光染色為陽性,。

3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。

4)不含有 HIV-1,、 HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌。

5)細(xì)胞生長方式：上皮樣,，不規(guī)則細(xì)胞,，貼壁培養(yǎng)。
Gentamicin Monoclonal Antibody /Gold 膠體金離子標(biāo)記小鼠抗慶大單克隆抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.5ml(35nm-40nm)

Defensin Beta2/beta-defensin 2/BD-2(rat) 防御素β2抗原(大鼠)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

銜接蛋白β抗體  beta Adaptin/AP2 0.1ml

ZADH1 英文名稱： 鋅結(jié)合乙醇脫氫酶結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體 0.2ml

DYRK1A 英文名稱： 絲酸/蘇酸蛋白激酶MNB抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-ER-beta(ser87) 磷酸化雌受體β抗體 規(guī)格 0.1ml

Defensin Beta2/beta-defensin 2/BD-2(rat) 防御素β2抗原(大鼠)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

ZO-1 peptide 胞質(zhì)緊密粘連蛋白1抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

 Phospho-Beta-Catenin (Ser33/37) 磷酸化β 連環(huán)素蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh PCDHGB4 原鈣粘蛋白γB4抗體 規(guī)格 0.2ml

IL1R1 Kit Human 人 IL1R1 / CD121a ELISA配對(duì)抗體 ELISA

THRB1 英文名稱： 甲狀腺受體β抗體(THβ1,，THβ2) 0.2ml

Phospho-cdc2 (Thr14) 英文名稱： 磷酸化周期素依賴激酶2抗體 0.1ml

 Phospho-Beta-Catenin (Ser33/37) 磷酸化β 連環(huán)素蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Dog IgM/PE-Cy7 PE-Cy7標(biāo)記的兔抗犬IgM抗體 0.1ml

RMD2 英文名稱： 微管動(dòng)力調(diào)節(jié)蛋白2抗體 0.2ml

丙型肝炎病毒-C區(qū)抗體  HCV-Core 0.1ml

 PKB/AKT-1 /FITC 熒光素標(biāo)記蛋白激酶B抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-RPS6KB1(Ser427) 磷酸化核糖體S6蛋白激酶抗體 規(guī)格 0.1ml

Bovine IgM (親和純化) IgMMulti-class antibodies規(guī)格： 1mg
小鼠胚胎成骨細(xì)胞前體細(xì)胞;MC3T3-E1PIPES,；1,4-哌二乙磺酸育亨賓DNA末端平滑補(bǔ)缺同位素（[35S]dATP）聚合酶標(biāo)記試劑盒

4,4-二硫二吡啶鳶尾黃素三聯(lián)重復(fù)子延展度同位素（[γ32P]ATP）酶標(biāo)記法檢測試劑盒

2,2'-二硫二吡啶原堿同位素[α32P]dCTP聚合酶標(biāo)記微衛(wèi)星擴(kuò)增試劑盒

4-甲基原兒茶同位素[γ32P]ATP酶標(biāo)記微衛(wèi)星擴(kuò)增試劑盒

MOPSO, Na；3-嗎啉-2-羥基磺酸鈉原兒茶酸同位素標(biāo)記放射活性TCA檢測試劑盒

MOPSO,；3-嗎啉-2-羥基磺酸原花青素B1隨機(jī)引物DNA探針同位素標(biāo)記產(chǎn)物*雙鏈制備試劑盒

3-(N-啉)磺酸鈉鹽原花青素B2同位素標(biāo)記放射活性濾膜法檢測試劑盒

3-(N-啉)磺酸半鈉鹽原花青素B3同位素標(biāo)記放射活性離心柱檢測試劑盒