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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應用領域 | 化工,生物產業(yè) |
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主要用途 | 僅供科研實驗 | 英文名稱 | Recombinant Calpain 5 (CAPN5) |
種屬 | Homo sapiens (Human,,人) | 規(guī)格 | 10μg50μg200μg1mg5mg |
品牌 | 研生 |
公司產品僅供科研使用,,不得用于臨床!
產品名稱 | 英文名稱 | 物種 |
鈣蛋白酶5(CAPN5)重組蛋白 | Recombinant Calpain 5 (CAPN5) | Homo sapiens (Human,,人) |
商品介紹:
HTRA3; nCL3; Calpain htra-3; New calpain 3 酶與激酶 物種:Homo sapiens (Human,,人) 來源:原核表達 宿主E.coli 內毒素水平:<1.0EU/μg(LAL法測定) 亞細胞定位::n/a 預測分子量:69.4kDa 實際分子量:70kDa(差異分析請參閱說明書) 片段與標簽:Phe2~Asn344 with N-terminal His and GST Tag 緩沖液成份:20mM Tris, 150mM NaCl緩沖液(pH8.0, 含有1mM EDTA, 1mM DTT, 0.01% SKL, 5% Trehalose和Proclin300) 性狀:凍干粉 純度:> 90% 等電點:5.8 應用:Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB. 規(guī)格10μg50μg200μg1mg5mg |
蛋白表達及純化:
1.培養(yǎng)500ml哺乳動物細胞,然后將重組質粒轉染到細胞中,,通過瞬時表達產生目標蛋白,。
2.收集含有目標蛋白的部分(細胞或培養(yǎng)上清)。
3.通過親和,,離子交換,,疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白。
4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結果并控制最終產品質量,。
5.通過Western-blot驗證目標蛋白正確性,。
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糖磺基轉移酶9(CHST9)重組蛋白英文名稱:Recombinant Carbohydrate Sulfotransferase 9 (CHST9)Homo sapiens (Human,人)
注意事項:
1,、不同細胞或組織樣品所需的固定時間有所不同,,應當根據細胞或組織的種類以及組織塊的大小來調整固定時間。
2,、雖然作用溫和,,但能硬化組織,固定時間過久會導致組織變脆,,切片時易碎。因此固定時間通常不宜超過 24 小時,。
3,、醛基與抗原蛋白的氨基交聯(lián)形成羧甲基,使抗原決定簇的三維構象出現(xiàn)空間障礙,。分子間交聯(lián)形成的網格結構可能部分或 掩蓋某些抗原決定簇,,使之不能充分暴露,,可造成假陰性的染色,影響免疫組化結果,。因此,,4%固定的細胞或組織樣品在進行免疫組化檢測時,有時需要對抗原先進行修復,,然后才能進行免疫染色等后續(xù)操作,。
4、本產品對人體有害,,操作時請小心,,并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內。
5,、為了您的安全和健康,,請穿實驗服并戴一次性手套操作
操作步驟:
Ⅰ 實體組織蛋白的提取
1. 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑, 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF,,混勻,。冰上保存數(shù)分鐘待用。
2. 每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中,,剪碎成3mm×3mm左右的小塊,,加入0.5~1 mL冷 Lysis Buffer,玻璃勻漿器上下手動勻漿15次,,注意低溫操作,;
3. 取組織勻漿液轉移到1.5mL預冷的離心管,離心10000轉/分,,4℃離心5 min,;
4. 取上清轉移至新的預冷的離心管中,即為全蛋白提取物,,蛋白定量(Bradford法,、BCA法);
5. 分裝保存于-70℃,避免反復凍融,。
Ⅱ 培養(yǎng)細胞蛋白提取
1. 貼壁培養(yǎng)的細胞,,吸去培養(yǎng)基后,加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次,,每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液,;
2. 懸浮培養(yǎng)的細胞或用細胞刮子刮下的貼壁細胞,將細胞及培養(yǎng)液移至離心管中,, 1000轉/分離心10 min,,再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS,1000轉/分離心5 min洗兩次;
3. 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑,, 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF,,混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用,。
4. 細胞洗滌后,,轉至新的預冷的離心管中,加入上述配制好的冷Lysis Buffer,,加入量如下表所示:
細胞數(shù)量 | Lysis Buffer加入量 |
107個 | 0.5 mL~1 mL |
5×106個 | 0.2 mL~0.5 mL |
5.置于4℃搖床平臺上,,溫和振蕩15 min;
6. 14,000rpm,,4℃離心15min,,取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量(Bradford法、BCA法),;
7. 分裝保存于-70℃,避免反復凍融,。
Cathelicidin產品名稱: 抗菌肽CAMP/LL-37抗菌蛋白抗體交叉反應: Human
Dnmt2產品名稱: DNA甲基轉移mei2抗體交叉反應: Human, Mouse, Rat, Pig, Cow, Sheep
P2X3產品名稱: 三磷suan苷受體受體P2X3抗體交叉反應: Human, Mouse, Rat, Pig, Horse, Rabbit
HAGHL產品名稱: 羥基酰水解mei樣蛋白抗體交叉反應: Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Horse, Sheep
DAP13產品名稱: 細胞分化相關蛋白13抗體交叉反應: Human, Rat
IP3 receptor產品名稱: 5-三磷suan肌醇受體1抗體交叉反應: Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Cow, Horse, Rabbit
Artemin產品名稱: Artemin抗體交叉反應: Human, Mouse, Rat
phospho-Tau (Ser515)產品名稱: 微管相關蛋白抗體交叉反應: Human, Mouse, Rat, Dog, Horse, Rabbit
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ITSN1產品名稱: 交叉蛋白1抗體交叉反應: Human, Mouse, Rat, Dog, Cow, Horse, Rabbit, Sheep
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人TAO激mei1(TAOK1)ELISA試劑盒TAOK1TAO激mei1ELISA試劑盒Human TAO Kinase 1(TAOK1)ELISA Kit
人TANK結合激mei1(TBK1)ELISA試劑盒TBK1TANK結合激mei1elisamei聯(lián)免疫試劑盒Human TANK Binding Kinase 1(TBK1)ELISA Kit
人Talpid人3蛋白(Talpid3)ELISA試劑盒Talpid3Talpid3蛋白elisa檢測試劑盒Human Talpid 3(Talpid3)ELISA Kit
人Talanin蛋白(TALN)ELISA試劑盒TALNTalanin蛋白elisa kitHuman Talanin(TALN)ELISA Kit
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