蛋白表達(dá)及純化：

1.培養(yǎng)500ml哺乳動(dòng)物細(xì)胞,，然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中,，通過(guò)瞬時(shí)表達(dá)產(chǎn)生目標(biāo)蛋白,。

2.收集含有目標(biāo)蛋白的部分（細(xì)胞或培養(yǎng)上清）。

3.通過(guò)親和,，離子交換,，疏水及凝膠過(guò)濾等多種層析方法純化表達(dá)的重組蛋白。

4.通過(guò)SDS-PAGE電泳檢測(cè)每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量,。

5.通過(guò)Western-blot驗(yàn)證目標(biāo)蛋白正確性,。
公司產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床,！

商品介紹：

相關(guān)產(chǎn)品：

Recombinant Mouse Dihydrofolate reductase DHFR宿主: E.Coli標(biāo)簽: N-terminal His Tag規(guī)格: 50μg, 200μg, 1mg種屬: Mouse

Recombinant Human CD73宿主: E.Coli標(biāo)簽: N-terminal His Tag規(guī)格: 50μg, 200μg, 1mg種屬: Human

Recombinant Human MCC宿主: E.Coli標(biāo)簽: N-terminal His-IF2DI Tag規(guī)格: 50μg, 200μg, 1mg種屬: Human

Recombinant Mouse pdgf-A宿主: E.Coli標(biāo)簽: N-terminal His Tag規(guī)格: 50μg, 200μg, 1mg種屬: Mouse   

操作步驟：

Ⅰ 實(shí)體組織蛋白的提取

1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑,， 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF,，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用,。

2．  每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中,，剪碎成3mm×3mm左右的小塊，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer,，玻璃勻漿器上下手動(dòng)勻漿15次,，注意低溫操作；

3． 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預(yù)冷的離心管,，離心10000轉(zhuǎn)/分，4℃離心5 min,；

4． 取上清轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中,，即為全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法,、BCA法）,；

5． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。

Ⅱ 培養(yǎng)細(xì)胞蛋白提取

1． 貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞,，吸去培養(yǎng)基后,，加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次,，每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液；

2． 懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞或用細(xì)胞刮子刮下的貼壁細(xì)胞,，將細(xì)胞及培養(yǎng)液移至離心管中,， 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min，再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS,，1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次,；

3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑， 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF,，混勻,。冰上保存數(shù)分鐘待用。

4． 細(xì)胞洗滌后,，轉(zhuǎn)至新的預(yù)冷的離心管中,，加入上述配制好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：

5．置于4℃搖床平臺(tái)上,，溫和振蕩15 min,；

6． 14,000rpm，4℃離心15min,，取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法,、BCA法）；

7． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融,。

注意事項(xiàng)：

1,、不同細(xì)胞或組織樣品所需的固定時(shí)間有所不同，應(yīng)當(dāng)根據(jù)細(xì)胞或組織的種類以及組織塊的大小來(lái)調(diào)整固定時(shí)間,。

2,、雖然作用溫和，但能硬化組織,，固定時(shí)間過(guò)久會(huì)導(dǎo)致組織變脆,，切片時(shí)易碎。因此固定時(shí)間通常不宜超過(guò) 24 小時(shí),。

3,、醛基與抗原蛋白的氨基交聯(lián)形成羧甲基，使抗原決定簇的三維構(gòu)象出現(xiàn)空間障礙,。分子間交聯(lián)形成的網(wǎng)格結(jié)構(gòu)可能部分或 掩蓋某些抗原決定簇,，使之不能充分暴露，可造成假陰性的染色,，影響免疫組化結(jié)果,。因此，4%固定的細(xì)胞或組織樣品在進(jìn)行免疫組化檢測(cè)時(shí),，有時(shí)需要對(duì)抗原先進(jìn)行修復(fù),，然后才能進(jìn)行免疫染色等后續(xù)操作,。

4、本產(chǎn)品對(duì)人體有害,，操作時(shí)請(qǐng)小心,，并注意有效防護(hù)以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。

5,、為了您的安全和健康,，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作 
SLAMF6/LY108產(chǎn)品名稱: SLAMF6抗體交叉反應(yīng): Mouse, Rat

應(yīng)用類型: Other英文名稱: KDM4B英文別名: KDM4B_HUMAN; Lysine-specific demethylase 4B; JHDM3B; JMJD2B; KIAA0876; EC:1.14.11.66; JmjC domain-containing histone demethylation protein 3B; Jumonji domain-containing protein 2B; [histone H3]-trimethyl-L-lysine(9) demethylase 4B; lysine demethylase 4B; MRD65; TDRD14B

SIGLEC1產(chǎn)品名稱: CD169抗體交叉反應(yīng): Human, Rat

CCM2產(chǎn)品名稱: 腦海綿狀畸形蛋白2抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Cow, Horse, Sheep

HSP27產(chǎn)品名稱: 熱休克蛋白27/HSP25抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow

Human PD-1產(chǎn)品名稱: 人程序性死亡1單克隆抗體交叉反應(yīng): Human

phospho-IRS1 (Tyr612)產(chǎn)品名稱: 胰島su受體底物-1抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Pig, Cow, Horse, Rabbit

應(yīng)用類型: Other英文名稱: AATF英文別名: Apoptosis antagonizing transcription factor; CHE1; DED; AATF_HUMAN;  Apoptosis-antagonizing transcription factor; Rb-binding protein Che-1; Protein AATF;Rb binding protein Che 1.

phospho-ZCWCC1 (Ser739)產(chǎn)品名稱: ZCWCC1抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat

DNase II產(chǎn)品名稱: 脫氧核糖核suanmei2抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Horse, Rabbit, Sheep   

血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2(ACE2)重組蛋白人對(duì)稱二甲基精氨suan(SMDA)ELISA試劑盒SMDA對(duì)稱二甲基精氨suanelisa檢測(cè)試劑盒Human Symmetric dimethylarginine(SMDA)ELISA Kit

人端粒重復(fù)序列結(jié)合因子2(TERF2)ELISA試劑盒TERF2端粒重復(fù)序列結(jié)合因子2elisa kitHuman TERF2 ELISA kit

人端粒重復(fù)序列結(jié)合因子1(TERF1)ELISA試劑盒TERF1端粒重復(fù)序列結(jié)合因子1ELISA試劑盒Human TERF1 ELISA kit

人端粒mei逆轉(zhuǎn)錄mei(TERT)ELISA試劑盒TERT端粒mei逆轉(zhuǎn)錄meielisamei聯(lián)免疫試劑盒Human TERT ELISA Kit

人端粒保護(hù)蛋白1(POT1)ELISA試劑盒POT1端粒保護(hù)蛋白1elisa檢測(cè)試劑盒Human POT1 ELISA kit