蛋白表達(dá)及純化：

1.培養(yǎng)500ml哺乳動(dòng)物細(xì)胞,，然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中,，通過瞬時(shí)表達(dá)產(chǎn)生目標(biāo)蛋白。

2.收集含有目標(biāo)蛋白的部分（細(xì)胞或培養(yǎng)上清）。

3.通過親和,，離子交換,，疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達(dá)的重組蛋白。

4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量,。

5.通過Western-blot驗(yàn)證目標(biāo)蛋白正確性,。
公司產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床,！

商品介紹：

相關(guān)產(chǎn)品：

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操作步驟：

Ⅰ 實(shí)體組織蛋白的提取

1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑， 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF,，混勻,。冰上保存數(shù)分鐘待用。

2．  每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中,，剪碎成3mm×3mm左右的小塊,，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer,，玻璃勻漿器上下手動(dòng)勻漿15次,，注意低溫操作；

3． 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預(yù)冷的離心管,，離心10000轉(zhuǎn)/分,，4℃離心5 min；

4． 取上清轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中,，即為全蛋白提取物,，蛋白定量（Bradford法、BCA法）,；

5． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融,。

Ⅱ 培養(yǎng)細(xì)胞蛋白提取

1． 貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞，吸去培養(yǎng)基后,，加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次,，每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液；

2． 懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞或用細(xì)胞刮子刮下的貼壁細(xì)胞,，將細(xì)胞及培養(yǎng)液移至離心管中,， 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min，再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS,，1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次,；

3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑， 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF,，混勻,。冰上保存數(shù)分鐘待用,。

4． 細(xì)胞洗滌后，轉(zhuǎn)至新的預(yù)冷的離心管中,，加入上述配制好的冷Lysis Buffer,，加入量如下表所示：

5．置于4℃搖床平臺(tái)上，溫和振蕩15 min,；

6． 14,000rpm,，4℃離心15min，取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法,、BCA法）,；

7． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。

注意事項(xiàng)：

1,、不同細(xì)胞或組織樣品所需的固定時(shí)間有所不同,，應(yīng)當(dāng)根據(jù)細(xì)胞或組織的種類以及組織塊的大小來調(diào)整固定時(shí)間。

2,、雖然作用溫和,，但能硬化組織，固定時(shí)間過久會(huì)導(dǎo)致組織變脆,，切片時(shí)易碎,。因此固定時(shí)間通常不宜超過 24 小時(shí)。

3,、醛基與抗原蛋白的氨基交聯(lián)形成羧甲基,，使抗原決定簇的三維構(gòu)象出現(xiàn)空間障礙。分子間交聯(lián)形成的網(wǎng)格結(jié)構(gòu)可能部分或 掩蓋某些抗原決定簇,，使之不能充分暴露,，可造成假陰性的染色，影響免疫組化結(jié)果,。因此,，4%固定的細(xì)胞或組織樣品在進(jìn)行免疫組化檢測時(shí)，有時(shí)需要對(duì)抗原先進(jìn)行修復(fù),，然后才能進(jìn)行免疫染色等后續(xù)操作,。

4、本產(chǎn)品對(duì)人體有害,，操作時(shí)請(qǐng)小心,，并注意有效防護(hù)以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。

5,、為了您的安全和健康,，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作 
NBPF16產(chǎn)品名稱: NBPF16蛋白抗體交叉反應(yīng): Human

LINGO3產(chǎn)品名稱: 富含亮氨suan重復(fù)跨膜神經(jīng)元3抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Horse, Rabbit

ZNF281產(chǎn)品名稱: 鋅指蛋白281抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Chicken, Pig, Cow, Horse, Sheep

DNMT1產(chǎn)品名稱: DNA甲基轉(zhuǎn)移mei1抗體交叉反應(yīng): Human

FAAP24產(chǎn)品名稱: FAAP24蛋白抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Pig, Cow, Horse, Sheep

A-Myb產(chǎn)品名稱: AMYB蛋白抗體產(chǎn)品別名: v-Myb;

Phospho-PIM1 (Tyr309)產(chǎn)品名稱: 前毒整合位點(diǎn)蛋白1抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Rabbit, Sheep

C1orf216產(chǎn)品名稱: 1號(hào)染色體開放閱讀框216抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Dog, Horse, Sheep

Butyryl-Histone H4 (Lys8)交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Pig, Cow, Horse, Rabbit, Goose, Zebrafish, Sheep, GPV, Firefly, Bee, Belt Jellyfish, Fish, GuineaPig, Hamster, Shrimp, Fruit Fly, Goat, Monkey, Cat, Donkey, Duck, Chimpanzee, Arabidopsis Thalian抗體來源: Rabbit

Spindly產(chǎn)品名稱: 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白99抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow   

肉毒堿棕櫚酰基轉(zhuǎn)移酶1B(CPT1B)重組蛋白人血紅蛋白α1(HBα1)ELISA試劑盒HBα1血紅蛋白α1elisamei聯(lián)免疫試劑盒Human Hemoglobin Alpha 1(HBa1)ELISA Kit

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