公司產(chǎn)品僅供科研實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品屬性：

產(chǎn)品名稱：糖原合酶激酶3α(GSK3a)重組蛋白   

物種：Rattus norvegicus (Rat,，大鼠)

英文名稱：Recombinant Glycogen Synthase Kinase 3 Alpha (GSK3a)

Serine/threonine-protein kinase GSK3A

信號轉(zhuǎn)導(dǎo)

酶與激酶

代謝通路

內(nèi)分泌學(xué)

相關(guān)產(chǎn)品：
Recombinant Human APOB宿主: E.Coli標(biāo)簽: N-terminal His-IF2DI Tag規(guī)格: 50μg, 200μg, 1mg種屬: Human

Recombinant Human ISM1宿主: E.Coli標(biāo)簽: N-terminal His-IF2DI Tag規(guī)格: 50μg, 200μg, 1mg種屬: Human

Recombinant Human AMOT-C宿主: E.Coli標(biāo)簽: N-terminal His-IF2DI Tag規(guī)格: 50μg, 200μg, 1mg種屬: Human

Recombinant ptxA宿主: E.Coli標(biāo)簽: N-terminal His Tag規(guī)格: 50μg, 200μg, 1mg種屬: Bordetella pertussis

標(biāo)簽選擇：

親和標(biāo)簽：蛋白重組表達(dá)過程中采用親和標(biāo)簽融合表達(dá)有兩方面的作用：一方面是為了使蛋白純化過程變得更加容易；另一方面是為了促進(jìn)某些不溶性蛋白可溶,。蛋白標(biāo)簽可分兩類：一類是短肽類標(biāo)簽；一類是長肽以融合蛋白（fused partner）形式共表達(dá),。使用不同的蛋白標(biāo)簽需要根據(jù)具體案例來分析,。

不同的系統(tǒng)步驟稍微有些不同的，大致步驟如下：

真核表達(dá)系統(tǒng)的重組蛋白表達(dá)步驟：

a.      選擇表達(dá)載體和宿主細(xì)胞（常用的CHO和HEK293）

b.      表達(dá)載體的構(gòu)建

c.      無內(nèi)毒素的質(zhì)粒抽提

d.      細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染

e.      表達(dá)小試,，條件優(yōu)化

f.       表達(dá)分析和鑒定（SDS-PGAE和WB）

g.      大量表達(dá)

h.      親和純化

i.        檢測和鑒定

原核表達(dá)系統(tǒng)的重組蛋白表達(dá)步驟：

a.      選擇表達(dá)載體

b.      密碼子優(yōu)化

c.      基因合成/亞克隆

d.      轉(zhuǎn)化表達(dá)菌株

e.      蛋白表達(dá)小試分析

f.       如果蛋白可溶,，蛋白親和純化

g.      如果蛋白不可溶，則需要變復(fù)性來制備可溶蛋白,。

h.      鑒定,，包括SDS-PAGE和WB鑒定

GZMH蛋白；表達(dá)蛋白的分析,、純化,、檢測

　　誘導(dǎo)表達(dá)成功后，表達(dá)蛋白的分析、純化,、檢測應(yīng)該順當(dāng),，按一般的實(shí)驗(yàn)步驟做沒太大的問題。

操作步驟 ：

根據(jù)使用量,，取每 1mL RIPA 加入 10uL PMSF,，使 PMSF 的zui終濃度為 1mM?；靹騻溆茫≒MSF 現(xiàn)用現(xiàn)加）,。

1、樣品前處理：

a)對于貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液,，用 PBS,、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。按照 6 孔板每孔細(xì)胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液,。用槍吹打數(shù)下,，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。

b)對于懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞,，用手指把細(xì)胞用力彈散,。按照6孔板每孔細(xì)胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液，再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞,。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀,。如果細(xì)胞量較多，必需分裝成 50-100 萬細(xì)胞/管,，然后再裂解,。

c)對于組織樣品： 把切成細(xì)小的碎片。按照每 20mg 組織加入 150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液,。(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液,，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量),。用玻璃勻漿器勻漿,，直至充分裂解。

2,、后處理：

將裂解后的樣品 10000-14000g 離心 3-5 分鐘,，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的蛋白濃度測定,、SDS-PAGE,、Western blotting 和免疫沉淀等操作

特點(diǎn)：

標(biāo)記：標(biāo)記反應(yīng)簡單、溫和且很少抑制抗體活性,，將與抗體共價(jià)結(jié)合是一種非常簡便,、直接的標(biāo)記方法,。

酶標(biāo)記：酶標(biāo)記抗體是將酶與特異性抗體經(jīng)適當(dāng)方法連接而成，其應(yīng)用范圍非常廣泛,，結(jié)果即時(shí)可見,、敏感性高。

熒光標(biāo)記：熒光基團(tuán)AbFluorTM是新型的熒光標(biāo)記物之一,，產(chǎn)品覆蓋350-770nm,。不同的AbFluor基團(tuán)經(jīng)恰當(dāng)?shù)募す饪砂l(fā)光， 從而得知抗體的定位和待測抗原的分布情況,，主要用于細(xì)胞分選或高分辨率免疫染色,，是一種非常好的亞細(xì)胞水平定位的方法。

Epsin 2產(chǎn)品名稱: 內(nèi)吞作用輔助蛋白EPN2抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Cow, Horse, Rabbit

phospho-Cytokeratin 8 (Ser431)產(chǎn)品名稱: 細(xì)胞角蛋白8抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Horse

GDF9產(chǎn)品名稱: 生長分化因子9抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Pig, Cow, Horse, Sheep

BMAL1產(chǎn)品名稱: 芳香烴受體核轉(zhuǎn)錄蛋白樣1抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Horse, Sheep

CCDC96產(chǎn)品名稱: 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白96抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Sheep

PSD95產(chǎn)品名稱: 突觸后密度蛋白95抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Rabbit, Monkey

14-3-3 zeta+delta產(chǎn)品名稱: 14-3-3 protein ζ/δ抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Cow, Horse, Rabbit

Human VEGF165產(chǎn)品名稱: 人內(nèi)皮生長因子單克隆抗體交叉反應(yīng): Human

Histone H3 (Di Methyl K36)產(chǎn)品名稱: 二甲基化組蛋白H3抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Pig, Cow, Rabbit, Fruit Fly

P2Y9產(chǎn)品名稱: G蛋白偶聯(lián)嘌呤受體p2y9抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Rabbit, Sheep
糖原合酶激酶3α(GSK3a)重組蛋白人去乙?；?/span>meiSirtuin-7(SIRT7/SIR2L7)ELISA試劑盒SIRT7/SIR2L7去乙?；痬eiSirtuin-7elisa kitHuman NAD-dependent deacetylase sirtuin-7,SIRT7/SIR2L7 ELISA kit

人去乙酰化meiSirtuin-6(SIRT6/SIR2L6)ELISA試劑盒SIRT6/SIR2L6去乙?；痬eiSirtuin-6ELISA試劑盒Human NAD-dependent deacetylase sirtuin-6,SIRT6/SIR2L6 ELISA kit

人去乙?；?/span>meiSirtuin-5(SIRT5/SIR2L5)ELISA試劑盒SIRT5/SIR2L5去乙酰化meiSirtuin-5elisamei聯(lián)免疫試劑盒Human NAD-dependent deacetylase sirtuin-5,SIRT5/SIR2L5 ELISA kit

人去乙?；?/span>meiSirtuin-4(SIRT4/SIR2L4)ELISA試劑盒SIRT4/SIR2L4去乙?；痬eiSirtuin-4elisa檢測試劑盒Human NAD-dependent ADP-ribosyltransferase sirtuin-4,SIRT4/SIR2L4 ELISA kit

人去乙酰化meiSirtuin-2(SIRT2/SIR2L/SIR2L2)ELISA試劑盒SIRT2/SIR2L/SIR2L2去乙?；痬eiSirtuin-2elisa kitHuman SIRT2/SIR2L/SIR2L2 ELISA Kit