蛋白表達及純化：

1.培養(yǎng)500ml哺乳動物細胞,，然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細胞中,，通過瞬時表達產(chǎn)生目標蛋白。

2.收集含有目標蛋白的部分（細胞或培養(yǎng)上清）,。

3.通過親和,，離子交換，疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白,。

4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量,。

5.通過Western-blot驗證目標蛋白正確性。
公司產(chǎn)品僅供科研使用,，不得用于臨床,！

商品介紹：

相關產(chǎn)品：

Recombinant Human FAM20C宿主: E.Coli標簽: N-terminal His Tag規(guī)格: 50μg, 200μg, 1mg種屬: Human

Recombinant Human WASL宿主: E.Coli標簽: N-terminal His-IF2DI Tag規(guī)格: 50μg, 200μg, 1mg種屬: Human

Recombinant Human CES1宿主: E.Coli標簽: N-terminal His-IF2DI Tag規(guī)格: 50μg, 200μg, 1mg種屬: Human

Recombinant Human LGALS2宿主: E.Coli標簽: N-terminal His Tag規(guī)格: 50μg, 200μg, 1mg種屬: Human   

操作步驟：

Ⅰ 實體組織蛋白的提取

1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑,， 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用,。

2．  每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中,，剪碎成3mm×3mm左右的小塊，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer,，玻璃勻漿器上下手動勻漿15次,，注意低溫操作；

3． 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預冷的離心管,，離心10000轉(zhuǎn)/分,，4℃離心5 min；

4． 取上清轉(zhuǎn)移至新的預冷的離心管中,，即為全蛋白提取物,，蛋白定量（Bradford法、BCA法）,；

5． 分裝保存于-70℃,避免反復凍融,。

Ⅱ 培養(yǎng)細胞蛋白提取

1． 貼壁培養(yǎng)的細胞，吸去培養(yǎng)基后,，加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次,，每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液；

2． 懸浮培養(yǎng)的細胞或用細胞刮子刮下的貼壁細胞,，將細胞及培養(yǎng)液移至離心管中,， 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min，再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS,，1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次,；

3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑， 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF,，混勻,。冰上保存數(shù)分鐘待用。

4． 細胞洗滌后,，轉(zhuǎn)至新的預冷的離心管中,，加入上述配制好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：

5．置于4℃搖床平臺上,，溫和振蕩15 min,；

6． 14,000rpm，4℃離心15min,，取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法,、BCA法）；

7． 分裝保存于-70℃,避免反復凍融,。

注意事項：

1,、不同細胞或組織樣品所需的固定時間有所不同,，應當根據(jù)細胞或組織的種類以及組織塊的大小來調(diào)整固定時間。

2,、雖然作用溫和,，但能硬化組織，固定時間過久會導致組織變脆,，切片時易碎,。因此固定時間通常不宜超過 24 小時。

3,、醛基與抗原蛋白的氨基交聯(lián)形成羧甲基,，使抗原決定簇的三維構象出現(xiàn)空間障礙。分子間交聯(lián)形成的網(wǎng)格結構可能部分或 掩蓋某些抗原決定簇,，使之不能充分暴露,，可造成假陰性的染色，影響免疫組化結果,。因此,，4%固定的細胞或組織樣品在進行免疫組化檢測時，有時需要對抗原先進行修復,，然后才能進行免疫染色等后續(xù)操作,。

4、本產(chǎn)品對人體有害,，操作時請小心,，并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。

5,、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作 
SP1產(chǎn)品名稱: 轉(zhuǎn)錄生長因子SP1單克隆抗體交叉反應: Human

Livin產(chǎn)品名稱: 凋亡蛋白抗體交叉反應: Human, Mouse, Rat, Dog, Cow

LINS產(chǎn)品名稱: LINS蛋白抗體交叉反應: Human

phospho-PPAR alpha (Ser12)產(chǎn)品名稱: α型-過氧化mei活化增生受體抗體交叉反應: Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Horse, GuineaPig

MLCK產(chǎn)品名稱: 肌球蛋白輕鏈激mei抗體交叉反應: Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Pig, Cow, Horse, Sheep, GuineaPig

caspase-3 p12 subunit產(chǎn)品名稱: 活化半胱胺suan蛋白mei蛋白3抗體交叉反應: Human, Mouse, Rat, Dog, Rabbit

CTDSPL產(chǎn)品名稱: CTDSPL蛋白抗體交叉反應: Human, Mouse, Rat, Chicken, Pig, Cow, Horse, Sheep

APOC3產(chǎn)品名稱: 載脂蛋白C3抗體交叉反應: Mouse, Rat

PPME1產(chǎn)品名稱: 蛋白磷suanmeiPPME1抗體交叉反應: Human, Mouse, Rat, Dog, Cow, Horse, Rabbit, Sheep

KIAA1598產(chǎn)品名稱: 閱讀障礙相關蛋白Shootin抗體交叉反應: Human, Mouse, Rat, Pig, Cow, Horse   

磷脂爬行酶1(PLSCR1)重組蛋白人復制蛋白A(RPA-70)ELISA試劑盒RPA-70復制蛋白AELISA試劑盒Human replication protein A,RPA-70 ELISA Kit

人附睪蛋白4(HE4)ELISA試劑盒HE4附睪蛋白4elisamei聯(lián)免疫試劑盒Human HE4 ELISA kit

人輔meiQ10(CoQ10)ELISA試劑盒CoQ10輔meiQ10elisa檢測試劑盒Human Coenzyme Q10,CoQ10 ELISA Kit

人封閉抗體(BA)ELISA試劑盒BA封閉抗體elisa kitHuman Blocking antibody,，BA ELISA Kit

人分泌成分(SC)ELISA試劑盒SC分泌成分ELISA試劑盒Human secretory component,SC ELISA Kit