蛋白表達及純化：

1.培養(yǎng)500ml哺乳動物細胞,，然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細胞中，通過瞬時表達產(chǎn)生目標蛋白,。

2.收集含有目標蛋白的部分（細胞或培養(yǎng)上清）,。

3.通過親和,，離子交換,，疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白。

4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量,。

5.通過Western-blot驗證目標蛋白正確性,。
公司產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床,！

商品介紹：

相關(guān)產(chǎn)品：

巖藻糖-1-磷suan鳥苷酰轉(zhuǎn)移mei(FPGT)重組蛋白英文名稱：Recombina Fucose-1-Phosp二磷酸肌醇戊基磷酸激酶1(PPIP5K1)重組蛋白英文名稱：Recombinant Diphosphoinositol Pentakisphosphate Kinase 1 (PPIP5K1)Homo sapiens (Human,，人)   

操作步驟：

Ⅰ 實體組織蛋白的提取

1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑， 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF,，混勻,。冰上保存數(shù)分鐘待用。

2．  每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中,，剪碎成3mm×3mm左右的小塊,，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃勻漿器上下手動勻漿15次,，注意低溫操作,；

3． 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預(yù)冷的離心管,，離心10000轉(zhuǎn)/分，4℃離心5 min,；

4． 取上清轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中,，即為全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法,、BCA法）,；

5． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。

Ⅱ 培養(yǎng)細胞蛋白提取

1． 貼壁培養(yǎng)的細胞,，吸去培養(yǎng)基后,，加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次，每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液,；

2． 懸浮培養(yǎng)的細胞或用細胞刮子刮下的貼壁細胞,，將細胞及培養(yǎng)液移至離心管中， 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min,，再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS,，1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次；

3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑,， 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF,，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用,。

4． 細胞洗滌后,，轉(zhuǎn)至新的預(yù)冷的離心管中，加入上述配制好的冷Lysis Buffer,，加入量如下表所示：

5．置于4℃搖床平臺上,，溫和振蕩15 min；

6． 14,000rpm,，4℃離心15min,，取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法、BCA法）,；

7． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融,。

注意事項：

1、不同細胞或組織樣品所需的固定時間有所不同,，應(yīng)當根據(jù)細胞或組織的種類以及組織塊的大小來調(diào)整固定時間,。

2、雖然作用溫和,，但能硬化組織,，固定時間過久會導(dǎo)致組織變脆，切片時易碎,。因此固定時間通常不宜超過 24 小時,。

3,、醛基與抗原蛋白的氨基交聯(lián)形成羧甲基，使抗原決定簇的三維構(gòu)象出現(xiàn)空間障礙,。分子間交聯(lián)形成的網(wǎng)格結(jié)構(gòu)可能部分或 掩蓋某些抗原決定簇,，使之不能充分暴露，可造成假陰性的染色,，影響免疫組化結(jié)果,。因此，4%固定的細胞或組織樣品在進行免疫組化檢測時,，有時需要對抗原先進行修復(fù),，然后才能進行免疫染色等后續(xù)操作。

4,、本產(chǎn)品對人體有害,，操作時請小心，并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi),。

5,、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作 
NAGLU產(chǎn)品名稱: N-乙?；?α葡萄糖苷mei抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Dog, Pig, Horse, Rabbit, Sheep

Endothelial lipase產(chǎn)品名稱: 內(nèi)皮脂肪mei單克隆抗體交叉反應(yīng): Human

DIAPH1產(chǎn)品名稱: 常染色體顯性遺傳相關(guān)蛋白1抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Dog, Horse, Rabbit

Factor VII heavy chain產(chǎn)品名稱: 凝因子7抗體交叉反應(yīng): Human

AVPR1A產(chǎn)品名稱: 抗利尿激su1A抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Rabbit

NMT1產(chǎn)品名稱: 豆蔻?；D(zhuǎn)移mei1抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Pig, Cow, Rabbit, Sheep

RERG產(chǎn)品名稱: Ras相關(guān)雌激su調(diào)節(jié)生長蛋白抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Cow, Rabbit, Sheep

PRR24產(chǎn)品名稱: 富含脯氨suan蛋白24抗體交叉反應(yīng): Human

45019產(chǎn)品名稱: 凋亡相關(guān)蛋白3抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Horse

MPRIP產(chǎn)品名稱: MPRIP蛋白抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Horse, GuineaPig   

N-酰基鞘氨醇酰胺水解酶2(ASAH2)重組蛋白人高爾基體蛋白A1(GOLGA1)ELISA試劑盒GOLGA1高爾基體蛋白A1ELISA試劑盒Human Golgin A1(GOLGA1)ELISA Kit

人高爾基糖蛋白1(GLG1)ELISA試劑盒GLG1高爾基糖蛋白1elisamei聯(lián)免疫試劑盒Human Golgi Glycoprotein 1(GLG1)ELISA Kit

人高爾基磷蛋白3(GOLPH3)ELISA試劑盒GOLPH3高爾基磷蛋白3elisa檢測試劑盒Human Golgi Phosphoprotein 3(GOLPH3)ELISA Kit

人干擾su調(diào)節(jié)因子9(IRF9)ELISA試劑盒IRF9干擾su調(diào)節(jié)因子9elisa kitHuman Interferon Regulatory Factor 9(IRF9)ELISA Kit

人干擾su調(diào)節(jié)因子4(IRF4)ELISA試劑盒IRF4干擾su調(diào)節(jié)因子4ELISA試劑盒Human Interferon Regulatory Factor 4(IRF4)ELISA Kit