蛋白表達及純化：

1.培養(yǎng)500ml哺乳動物細胞,，然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細胞中,，通過瞬時表達產(chǎn)生目標(biāo)蛋白,。

2.收集含有目標(biāo)蛋白的部分（細胞或培養(yǎng)上清）。

3.通過親和,，離子交換,，疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白。

4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量,。

5.通過Western-blot驗證目標(biāo)蛋白正確性,。
公司產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床,！

商品介紹：

相關(guān)產(chǎn)品：

組織蛋白酶Z(CTSZ)重組蛋白Recombinant Deoxyribonuclease I Like Protein 3 (DNASE1L3)

組織蛋白酶W(CTSW)重組蛋白Recombinant Granzyme H (GZMH)

組織蛋白酶V(CTSV)重組蛋白Recombinant High Temperature Requirement Factor A1 (HTRA1)

組織蛋白酶V(CTSV)活性蛋白Recombinant MARCKS Related Protein (MARCKSL1)   

操作步驟：

Ⅰ 實體組織蛋白的提取

1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑,， 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF，混勻,。冰上保存數(shù)分鐘待用,。

2．  每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中，剪碎成3mm×3mm左右的小塊,，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer,，玻璃勻漿器上下手動勻漿15次，注意低溫操作,；

3． 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預(yù)冷的離心管,，離心10000轉(zhuǎn)/分，4℃離心5 min,；

4． 取上清轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中，即為全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法,、BCA法）,；

5． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。

Ⅱ 培養(yǎng)細胞蛋白提取

1． 貼壁培養(yǎng)的細胞,，吸去培養(yǎng)基后,，加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次，每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液,；

2． 懸浮培養(yǎng)的細胞或用細胞刮子刮下的貼壁細胞,，將細胞及培養(yǎng)液移至離心管中， 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min,，再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS,，1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次；

3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑,， 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF,，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用,。

4． 細胞洗滌后,，轉(zhuǎn)至新的預(yù)冷的離心管中，加入上述配制好的冷Lysis Buffer,，加入量如下表所示：

5．置于4℃搖床平臺上,，溫和振蕩15 min；

6． 14,000rpm,，4℃離心15min,，取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法、BCA法）,；

7． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融,。

注意事項：

1、不同細胞或組織樣品所需的固定時間有所不同,，應(yīng)當(dāng)根據(jù)細胞或組織的種類以及組織塊的大小來調(diào)整固定時間,。

2、雖然作用溫和,，但能硬化組織,，固定時間過久會導(dǎo)致組織變脆，切片時易碎,。因此固定時間通常不宜超過 24 小時,。

3、醛基與抗原蛋白的氨基交聯(lián)形成羧甲基,，使抗原決定簇的三維構(gòu)象出現(xiàn)空間障礙,。分子間交聯(lián)形成的網(wǎng)格結(jié)構(gòu)可能部分或 掩蓋某些抗原決定簇,，使之不能充分暴露，可造成假陰性的染色,，影響免疫組化結(jié)果,。因此，4%固定的細胞或組織樣品在進行免疫組化檢測時,，有時需要對抗原先進行修復(fù),，然后才能進行免疫染色等后續(xù)操作。

4,、本產(chǎn)品對人體有害,，操作時請小心，并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi),。

5,、為了您的安全和健康,，請穿實驗服并戴一次性手套操作 
RASA3產(chǎn)品名稱: Ras-GTPmei激活蛋白3抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Pig, Cow, Horse

TMEM85產(chǎn)品名稱: 跨膜蛋白85抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Pig, Cow, Horse, Rabbit, Sheep

Lck產(chǎn)品名稱: 淋巴細胞特異性蛋白酪氨suan激mei抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Rabbit

ARFGAP2產(chǎn)品名稱: 鋅指蛋白289抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Pig, Cow, Horse, Sheep

GASC1/KDM4C產(chǎn)品名稱: 鱗狀細胞增強蛋白1抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Horse, Rabbit

TRPM6產(chǎn)品名稱: 瞬時受體電位陽離子通道亞家族M成員6抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Cow, Horse, Sheep

COL20A1產(chǎn)品名稱: 膠原樣蛋白抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Dog, Cow, Sheep

IL13RA2產(chǎn)品名稱: 白細胞介su13受體a2抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat

Tollip產(chǎn)品名稱: Toll蛋白相互作用蛋白抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Pig, Cow, Horse

LRRC41產(chǎn)品名稱: LRRC41蛋白抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Horse, Sheep   

腺苷裂解酶(ADSL)重組蛋白人G組著色性干皮病偶聯(lián)因子(XPG)ELISA試劑盒XPGG組著色性干皮病偶聯(lián)因子elisamei聯(lián)免疫試劑盒Human Xeroderma Pigmentosum, Complementation Group G(XPG)ELISA Kit

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人G抗原5(GAGE5)ELISA試劑盒GAGE5G抗原5elisamei聯(lián)免疫試劑盒Human G Antigen 5(GAGE5)ELISA Kit