蛋白表達(dá)及純化：

1.培養(yǎng)500ml哺乳動物細(xì)胞,，然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中，通過瞬時表達(dá)產(chǎn)生目標(biāo)蛋白,。

2.收集含有目標(biāo)蛋白的部分（細(xì)胞或培養(yǎng)上清）,。

3.通過親和，離子交換,，疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達(dá)的重組蛋白,。

4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量。

5.通過Western-blot驗證目標(biāo)蛋白正確性,。
公司產(chǎn)品僅供科研使用,，不得用于臨床！

商品介紹：

相關(guān)產(chǎn)品：

Recombinant Human MAP3K5宿主: E.Coli標(biāo)簽: N-terminal His Tag規(guī)格: 50μg, 200μg, 1mg種屬: Human

Recombinant Human JTB宿主: E.Coli標(biāo)簽: N-terminal His Tag規(guī)格: 50μg, 200μg, 1mg種屬: Human

Recombinant Human VDAC2宿主: E.Coli標(biāo)簽: N-terminal His-IF2DI Tag規(guī)格: 50μg, 200μg, 1mg種屬: Human

Recombinant Human NME4宿主: E.Coli標(biāo)簽: N-terminal His Tag規(guī)格: 50μg, 200μg, 1mg種屬: Human   

操作步驟：

Ⅰ 實體組織蛋白的提取

1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑， 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF,，混勻,。冰上保存數(shù)分鐘待用。

2．  每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中,，剪碎成3mm×3mm左右的小塊,，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃勻漿器上下手動勻漿15次,，注意低溫操作,；

3． 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預(yù)冷的離心管，離心10000轉(zhuǎn)/分,，4℃離心5 min,；

4． 取上清轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中，即為全蛋白提取物,，蛋白定量（Bradford法,、BCA法）,；

5． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。

Ⅱ 培養(yǎng)細(xì)胞蛋白提取

1． 貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞,，吸去培養(yǎng)基后，加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次,，每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液,；

2． 懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞或用細(xì)胞刮子刮下的貼壁細(xì)胞，將細(xì)胞及培養(yǎng)液移至離心管中,， 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min,，再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS，1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次,；

3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑,， 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF，混勻,。冰上保存數(shù)分鐘待用,。

4． 細(xì)胞洗滌后，轉(zhuǎn)至新的預(yù)冷的離心管中,，加入上述配制好的冷Lysis Buffer,，加入量如下表所示：

5．置于4℃搖床平臺上，溫和振蕩15 min,；

6． 14,000rpm,，4℃離心15min，取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法,、BCA法）,；

7． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。

注意事項：

1,、不同細(xì)胞或組織樣品所需的固定時間有所不同,，應(yīng)當(dāng)根據(jù)細(xì)胞或組織的種類以及組織塊的大小來調(diào)整固定時間。

2,、雖然作用溫和,，但能硬化組織，固定時間過久會導(dǎo)致組織變脆,，切片時易碎,。因此固定時間通常不宜超過 24 小時。

3,、醛基與抗原蛋白的氨基交聯(lián)形成羧甲基,，使抗原決定簇的三維構(gòu)象出現(xiàn)空間障礙。分子間交聯(lián)形成的網(wǎng)格結(jié)構(gòu)可能部分或 掩蓋某些抗原決定簇,，使之不能充分暴露,，可造成假陰性的染色,，影響免疫組化結(jié)果。因此,，4%固定的細(xì)胞或組織樣品在進(jìn)行免疫組化檢測時,，有時需要對抗原先進(jìn)行修復(fù)，然后才能進(jìn)行免疫染色等后續(xù)操作,。

4,、本產(chǎn)品對人體有害，操作時請小心,，并注意有效防護(hù)以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi),。

5、為了您的安全和健康,，請穿實驗服并戴一次性手套操作 
TOMM70A產(chǎn)品名稱: TOMM70A蛋白抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat

N-cadherin產(chǎn)品名稱: N-鈣粘附分子抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Pig, Cow, Horse, Rabbit, Sheep

phospho-Tau (Ser579)產(chǎn)品名稱: 微管相關(guān)蛋白抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Dog, Cow, Horse, Rabbit

Claudin 10產(chǎn)品名稱: 緊密連接蛋白10抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Pig, Cow, Horse, Rabbit, Sheep

Livin產(chǎn)品名稱: 凋亡蛋白抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Cow, Rabbit, Sheep

CRTC1產(chǎn)品名稱: 環(huán)苷suan應(yīng)答元件結(jié)合蛋白轉(zhuǎn)錄共激活因子TORC1抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Cow

GlyR alpha 1 + 2 + 3產(chǎn)品名稱: 甘氨suan受體alpha 1/2/3型抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Pig, Cow, Horse, Rabbit

MMP1產(chǎn)品名稱: 基質(zhì)金屬蛋白mei-1抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Cow, Rabbit

應(yīng)用類型: 相關(guān)產(chǎn)品???英文名稱: SARS-CoV-2 () Nucleocapsid英文別名: SARS-CoV-2 Nucleocapsid Protein; SARS-CoV-2 NP; nucleocapsid protein [Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2]; vel coronavirus N Protein; vel coronavirus Nucleocapsid Protein;  Nucleoprotein;  N; 2019nCoV N;  N Protein; 2019 ncov N Protein;  nucleocapsid protein.

CDCA7產(chǎn)品名稱: 細(xì)胞分裂周期相關(guān)蛋白交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Pig, Cow, Rabbit, Sheep   

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