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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應用領域 | 化工,生物產業(yè) |
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主要用途 | 僅供科研研究實驗 | 英文名稱 | Recombinant 5'-3'Exoribonuclease 1 (XRN1) |
物種 | Homo sapiens (Human,人) | 規(guī)格 | 10μg50μg200μg1mg5mg |
品牌 | 研生 |
商品介紹:
SEP1; Exoribonuclease I; Strand-exchange protein 1 homolog 酶與激酶 物種:Homo sapiens (Human,,人) 來源:原核表達 宿主E.coli 內毒素水平:<1.0EU/μg(LAL法測定) 亞細胞定位::細胞質 預測分子量:37.4kDa 實際分子量:37kDa(差異分析請參閱說明書) 片段與標簽:Tyr1394~Glu1706 with N-terminal His Tag 緩沖液成份:PBS, pH7.4, containing 0.01% SKL, 5% Trehalose. 性狀:凍干粉 純度:> 97% 等電點:9.6 應用:Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB. 規(guī)格10μg50μg200μg1mg5mg |
公司產品僅供科研使用,不得用于臨床!
產品名稱 | 英文名稱 | 物種 |
5'-3'外切核糖核酸酶1(XRN1)重組蛋白 | Recombinant 5'-3'Exoribonuclease 1 (XRN1) | Homo sapiens (Human,,人) |
蛋白表達及純化:
1.培養(yǎng)500ml哺乳動物細胞,然后將重組質粒轉染到細胞中,,通過瞬時表達產生目標蛋白,。
2.收集含有目標蛋白的部分(細胞或培養(yǎng)上清)。
3.通過親和,,離子交換,,疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白。
4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結果并控制最終產品質量,。
5.通過Western-blot驗證目標蛋白正確性,。
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操作步驟:
Ⅰ 實體組織蛋白的提取
1. 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑, 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF,,混勻,。冰上保存數(shù)分鐘待用。
2. 每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中,,剪碎成3mm×3mm左右的小塊,,加入0.5~1 mL冷 Lysis Buffer,玻璃勻漿器上下手動勻漿15次,,注意低溫操作,;
3. 取組織勻漿液轉移到1.5mL預冷的離心管,離心10000轉/分,,4℃離心5 min,;
4. 取上清轉移至新的預冷的離心管中,即為全蛋白提取物,,蛋白定量(Bradford法,、BCA法);
5. 分裝保存于-70℃,避免反復凍融,。
Ⅱ 培養(yǎng)細胞蛋白提取
1. 貼壁培養(yǎng)的細胞,,吸去培養(yǎng)基后,加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次,,每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液,;
2. 懸浮培養(yǎng)的細胞或用細胞刮子刮下的貼壁細胞,將細胞及培養(yǎng)液移至離心管中,, 1000轉/分離心10 min,,再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS,1000轉/分離心5 min洗兩次,;
3. 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑,, 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF,混勻,。冰上保存數(shù)分鐘待用,。
4. 細胞洗滌后,轉至新的預冷的離心管中,,加入上述配制好的冷Lysis Buffer,,加入量如下表所示:
細胞數(shù)量 | Lysis Buffer加入量 |
107個 | 0.5 mL~1 mL |
5×106個 | 0.2 mL~0.5 mL |
5.置于4℃搖床平臺上,溫和振蕩15 min,;
6. 14,000rpm,,4℃離心15min,,取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量(Bradford法、BCA法),;
7. 分裝保存于-70℃,避免反復凍融,。
OGDH交叉反應: Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Pig, Cow, Horse, Rabbit, Goose, Zebrafish, Sheep, GPV, Firefly, Bee, Belt Jellyfish, Fish, GuineaPig, Hamster, Shrimp, Fruit Fly, Goat, Monkey, Cat, Donkey, Duck, Chimpanzee, Arabidopsis Thalian抗體來源: Mouse
MDFI產品名稱: 肌原調節(jié)蛋白1抗體交叉反應: Human, Mouse, Rat, Pig, Cow, Horse, Sheep
PKC zeta產品名稱: 蛋白激meiC zeta 抗體交叉反應: Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Horse, Rabbit, Sheep
PCDHGA7產品名稱: 原鈣粘蛋白γA7抗體交叉反應: Human, Mouse, Rat
Progesterone Receptor產品名稱: 孕激su受體抗體交叉反應: Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Horse
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Met Enkephalin產品名稱: 甲硫氨suan腦啡肽抗體交叉反應: Human, Mouse, Rat
NANP產品名稱: N-乙酰神經氨suan磷suanmei交叉反應: Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Pig, Cow, Rabbit, Sheep
Hsp104產品名稱: 熱休克蛋白104抗體交叉反應: Human, Mouse
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注意事項:
1,、不同細胞或組織樣品所需的固定時間有所不同,,應當根據細胞或組織的種類以及組織塊的大小來調整固定時間。
2,、雖然作用溫和,,但能硬化組織,固定時間過久會導致組織變脆,,切片時易碎,。因此固定時間通常不宜超過 24 小時。
3,、醛基與抗原蛋白的氨基交聯(lián)形成羧甲基,,使抗原決定簇的三維構象出現(xiàn)空間障礙。分子間交聯(lián)形成的網格結構可能部分或 掩蓋某些抗原決定簇,,使之不能充分暴露,,可造成假陰性的染色,影響免疫組化結果,。因此,,4%固定的細胞或組織樣品在進行免疫組化檢測時,有時需要對抗原先進行修復,,然后才能進行免疫染色等后續(xù)操作,。
4、本產品對人體有害,,操作時請小心,,并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內。
5,、為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作
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