蛋白表達及純化：

1.培養(yǎng)500ml哺乳動物細胞，然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細胞中,，通過瞬時表達產(chǎn)生目標蛋白,。

2.收集含有目標蛋白的部分（細胞或培養(yǎng)上清）。

3.通過親和,，離子交換,，疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白。

4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量,。

5.通過Western-blot驗證目標蛋白正確性,。
公司產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床,！

商品介紹：

相關(guān)產(chǎn)品：

硫代硫酸鹽轉(zhuǎn)硫酶(TST)重組蛋白英文名稱：Recombinant Thiosulfate Sulfurtransferase (TST)Mus musculus (Mouse,，小鼠)

硫嘌呤甲基轉(zhuǎn)移酶(TPMT)重組蛋白英文名稱：Recombinant Thiopurine Methyltransferase (TPMT)Homo sapiens (Human,，人)

硫酸酯酶1(SULF1)重組蛋白英文名稱：Recombinant Sulfatase 1 (SULF1)Homo sapiens (Human，人)

硫酸酯酶2(SULF2)重組蛋白英文名稱：Recombinant Sulfatase 2 (SULF2)Homo sapiens (Human,，人)   

操作步驟：

Ⅰ 實體組織蛋白的提取

1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑,， 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF，混勻,。冰上保存數(shù)分鐘待用,。

2．  每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中，剪碎成3mm×3mm左右的小塊,，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer,，玻璃勻漿器上下手動勻漿15次，注意低溫操作,；

3． 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預冷的離心管,，離心10000轉(zhuǎn)/分，4℃離心5 min,；

4． 取上清轉(zhuǎn)移至新的預冷的離心管中,，即為全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法,、BCA法）,；

5． 分裝保存于-70℃,避免反復凍融。

Ⅱ 培養(yǎng)細胞蛋白提取

1． 貼壁培養(yǎng)的細胞,，吸去培養(yǎng)基后,，加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次，每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液,；

2． 懸浮培養(yǎng)的細胞或用細胞刮子刮下的貼壁細胞,，將細胞及培養(yǎng)液移至離心管中,， 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min,，再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS，1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次,；

3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑,， 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF，混勻,。冰上保存數(shù)分鐘待用,。

4． 細胞洗滌后，轉(zhuǎn)至新的預冷的離心管中,，加入上述配制好的冷Lysis Buffer,，加入量如下表所示：

5．置于4℃搖床平臺上，溫和振蕩15 min,；

6． 14,000rpm,，4℃離心15min,，取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法、BCA法）,；

7． 分裝保存于-70℃,避免反復凍融,。

注意事項：

1、不同細胞或組織樣品所需的固定時間有所不同,，應當根據(jù)細胞或組織的種類以及組織塊的大小來調(diào)整固定時間,。

2、雖然作用溫和,，但能硬化組織,，固定時間過久會導致組織變脆，切片時易碎,。因此固定時間通常不宜超過 24 小時,。

3、醛基與抗原蛋白的氨基交聯(lián)形成羧甲基,，使抗原決定簇的三維構(gòu)象出現(xiàn)空間障礙,。分子間交聯(lián)形成的網(wǎng)格結(jié)構(gòu)可能部分或 掩蓋某些抗原決定簇，使之不能充分暴露,，可造成假陰性的染色,，影響免疫組化結(jié)果。因此,，4%固定的細胞或組織樣品在進行免疫組化檢測時,，有時需要對抗原先進行修復，然后才能進行免疫染色等后續(xù)操作,。

4,、本產(chǎn)品對人體有害，操作時請小心,，并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi),。

5、為了您的安全和健康,，請穿實驗服并戴一次性手套操作 
CD62P產(chǎn)品名稱: 可溶性P選擇su抗體交叉反應: Human

Factor I light chain產(chǎn)品名稱: 補體因子I輕鏈抗體交叉反應: Mouse, Rat, Cow

CCR7產(chǎn)品名稱: 細胞表面趨化因子受體7單克隆抗體交叉反應: Human

SLC30A2產(chǎn)品名稱: 溶質(zhì)載體轉(zhuǎn)運蛋白家族30成員2抗體交叉反應: Human

Meningioma 1/MN1產(chǎn)品名稱: 腦膜蛋白1抗體交叉反應: Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Horse, Sheep

應用類型: Other英文名稱: phospho-C-Myc (Ser62)英文別名: c-Myc(S62); Myc(Phospho-Ser62); Myc(Phospho-S62); p-Myc(S62); p-Myc(S62); AU016757; Avian myelocytomatosis viral oncogene ELL2產(chǎn)品名稱: 聚合mei延伸因子2抗體交叉反應: Human, Mouse, Rat, Pig, Cow, Horse, Rabbit

C9orf174產(chǎn)品名稱: 9號染色體開放閱讀框174抗體交叉反應: Human, Mouse, Rat

Twist2產(chǎn)品名稱: TWIST蛋白2抗體抗體交叉反應: Human, Mouse, Rat, Chicken, Pig, Cow, Horse, Rabbit

ABHD5產(chǎn)品名稱: 自水解mei結(jié)構(gòu)域5蛋白抗體交叉反應: Human, Mouse, Rat, Dog, Cow, Rabbit, Sheep   

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