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腫瘤細胞的分離和純化

時間:2017-9-27閱讀:687
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腫瘤細胞的分離和純化:
1.取2~3公斤重的家兔,,耳緣靜脈注射10ml空氣處死動物或注射2ml(含130mg)戊巴比妥麻醉動物,。仰臥固定,剪開胸壁,。以下過程注意無菌操作,。小心從環(huán)狀軟骨下方剪下氣管,分離心臟和血管,,取出肺,,剪去脂肪和結締組織。用無菌紗布小心擦凈肺表面,,稱重,。

2.分離肺泡巨噬細胞:用夾子夾住氣管,使肺懸空,。向氣管中注射40ml無菌的冷生理鹽水,,讓生理鹽水進入全部肺泡。用鑷子提起氣管,,從夾子下面剪斷氣管,,將肺中的液體倒入離心管中。再用同樣方法,,用40ml無菌冷生理鹽水沖洗肺泡,,合并浸出液,置4℃,。

3.分離肺組織中的巨噬細胞:取出肺泡巨噬細胞后,,剪去氣管,,將肺組織放在有冷RPMI-1640培養(yǎng)液的平皿中。平皿置冰上,,用吸滿冷RPMI-1640培養(yǎng)液的20ml注射器接23號針頭,,一邊灌注一邊用針頭梳離肺組織,直到肺組織與支氣管樹全部分離,。使肺組織通過200目的鋼絲網(wǎng),,分離單個細胞。

4.以下過程均在4℃中進行,。分別處理肺泡巨噬細胞和肺組織中的巨噬細胞:離心200×g 10分鐘,,去上清液。輕彈試管,,懸浮細胞,,加入10ml低滲液(20mmol/L Tris, 0.75%氯化銨,pH7.4),,37℃處理3~5分鐘,,溶解紅細胞。紅細胞通常分別占肺泡巨噬細胞和組織巨噬細胞的1%和10%,。也可以不用低滲處理,,直接在淋巴細胞分離液上分離腫瘤細胞

5.離心200×g 10分鐘,,去上清液,。用RPMI-1640培養(yǎng)液洗滌細胞一次。將細胞懸液加在淋巴細胞分離液(比重1.077)上,,離心400×g 20分鐘,,收集交界面的巨噬細胞。棄去沉淀的死細胞和紅細胞,。

6.用RPMI-1640培養(yǎng)液洗滌巨噬細胞2次,。臺盼藍染色檢測細胞活力和細胞數(shù),將細胞配成所需濃度,。此時巨噬細胞活力可達90%以上,,巨噬細胞占全部細胞的90%以上。
    含量:    進口/國產(chǎn)    蛇床子素    20mg/支    英文名稱    Osthole    規(guī)格:
    含量:    進口/國產(chǎn)    麝香酮    20mg/支    英文名稱    Muscone    規(guī)格:
水楊甙;水楊素    含量:    進口/國產(chǎn)    水楊苷    20mg/支    英文名稱    D-(−)-Salicin    規(guī)格:
水飛薊素;西利馬林    含量:    進口/國產(chǎn)    水飛薊賓    20mg/支    英文名稱    Silymarin    規(guī)格:
    含量:    進口/國產(chǎn)    蕓香柚皮苷    20mg/支    英文名稱    Narirutin    規(guī)格:
    含量:    進口/國產(chǎn)    芍藥苷    20mg/支    英文名稱    Paeoniflorin    規(guī)格:
    含量:    進口/國產(chǎn)    鼠李糖    20mg/支    英文名稱    L-Rhamnose    規(guī)格:
腫瘤細胞

 

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